貨號：CPK0010

BrdU?作為一種胸腺嘧啶核苷的類似物（其化學(xué)結(jié)構(gòu)特點(diǎn)是胸腺嘧啶的堿基嘧啶環(huán)上與5位C 原子連接的甲基被溴代替），像胸腺嘧啶核苷一樣可摻入到細(xì)胞合成的DNA 中。當(dāng)細(xì)胞處于DNA 合成期（S 期）而同時(shí)又有BrdU 存在時(shí), 就會有BrdU 摻入新合成的DNA 中，只要細(xì)胞不消亡，這種BrdU 就在胞核的DNA 中長期存留。

本試劑盒中的小鼠抗BrdU 單克隆抗體可以與摻入進(jìn)DNA 的結(jié)合，再加入HRP 標(biāo)記的羊抗小鼠，最后通過TMB 底物液顯色，其顯色值高低與BrdU 摻入細(xì)胞量成正比。

試劑盒優(yōu)點(diǎn)：

與其他細(xì)胞增殖檢測方法相比較，本試劑盒靈敏度高、沒有放射性污染，其可以檢測的最低檢測限度為50-100?個(gè)細(xì)胞，并且只檢測新增殖細(xì)胞。

主要用途：

細(xì)胞因子、生長因子、分裂素和營養(yǎng)因子刺激后，監(jiān)測和定量細(xì)胞增殖；

分析藥物的細(xì)胞毒性個(gè)，如抗癌藥物等；

分析不同成分對細(xì)胞增殖的抑制或者刺激作用

實(shí)驗(yàn)樣品類型：

貼壁或懸浮細(xì)胞

?

試劑盒組分：

組分名稱

?規(guī)格

數(shù)量

存儲

細(xì)胞培養(yǎng)板

96孔

1

RT

BrdU?母液（100x）

125ul

1

-20℃

細(xì)胞固定液

12.5ml

1

-20℃

細(xì)胞變性液

12.5ml

1

4℃

BrdU?檢測抗體（100x)

125ul

1

-20℃

HRP?標(biāo)記羊抗小鼠（100x）

125ul

1

-20℃

抗體稀釋液

30ml

1

4℃/-20℃

洗滌緩沖液（10x）

30ml

1

4℃

TMB?底物液

12.5ml

1

4℃

底物終止液

12.5ml

1

4℃

產(chǎn)品使用說明書

1

1

試劑盒保存：短期存放可放置2-8℃，長期存放請按說明分別存放。

?

使用之前最好離心，將液體全部歸集到管底，然后再開蓋；

以下試劑根據(jù)所需要的使用量臨用前配置，不建議長期儲存；

10?x?BrdU?溶液：使用前將BrdU?母液（100?x）用細(xì)胞培養(yǎng)液1:10?稀釋成10?x?BrdU?溶液；

BrdU?檢測抗體：使用前將BrdU?檢測抗體（100?x）用抗體稀釋液1:100?稀釋成工作液；

HRP?標(biāo)記羊抗小鼠：使用前按需將HRP?標(biāo)記羊抗小鼠（100?x）用抗體稀釋液1:100?稀釋；

洗滌緩沖液：使用前按需將洗滌緩沖液（10?x）用dH2O?作1：10?稀釋.

?

試劑盒使用步驟：

1.?細(xì)胞培養(yǎng)：

細(xì)胞鋪板培養(yǎng)，每孔2500-10000?個(gè)，在37℃?5% CO2?孵箱中培養(yǎng)，根據(jù)細(xì)胞類型培養(yǎng)相應(yīng)時(shí)間（細(xì)胞密度至50-60%左右最好），在合適的時(shí)候加入加入待測試的實(shí)驗(yàn)組分，培養(yǎng)到合適的時(shí)間。

2.?標(biāo)記BrdU：

將10?x?BrdU（5-溴-2′-脫氧尿苷）加入培養(yǎng)細(xì)胞中，終濃度為1X，培養(yǎng)標(biāo)記1-48h(根據(jù)實(shí)驗(yàn)試劑需求來確定最佳標(biāo)記時(shí)間，同時(shí)需要設(shè)置不加入BrdU作為空白對照)。

3.?固定與檢測：

1）丟棄細(xì)胞培養(yǎng)上清，每孔加入100ul?細(xì)胞固定液,室溫固定30?分鐘（根據(jù)細(xì)胞特點(diǎn)確定最佳固定時(shí)間）；

2）吸干孔里溶液，每孔加入100ul?細(xì)胞變性液,室溫變性5-15分鐘（根據(jù)細(xì)胞特點(diǎn)確定最佳固定時(shí)間）；

3）吸干孔里溶液，每孔加入300ul?洗滌液，洗三次；

4）吸干孔里溶液，每孔加入100ul BrdU?檢測抗體，37℃輕微震蕩反應(yīng)?1小時(shí)；

5）吸干孔里溶液，每孔加入300ul?洗滌液，洗三次；

6）加入稀釋好的HRP?標(biāo)記羊抗小鼠，每孔100ul，37℃反應(yīng) 1小時(shí)；

7）吸干孔內(nèi)溶液，每孔加入300ul 洗滌液洗三次；

8）每孔加入100ul TMB 底物液，室溫反應(yīng)5-15 分鐘；

9）每孔加入100ul 底物終止液，酶標(biāo)儀上讀取OD450值。

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注意事項(xiàng)：

1）若是懸浮細(xì)胞，必須謹(jǐn)慎操作；細(xì)胞固定的時(shí)候必須小心吸取細(xì)胞上清，必要的時(shí)候適當(dāng)離心；

2）在多次洗滌過程中必須小心，不可將細(xì)胞洗掉；

3）固定或變性不徹底都將導(dǎo)致本實(shí)驗(yàn)失?。?/span>

4）加入底物之后顯色必須謹(jǐn)慎，不要顯色過度以至于背景太高；加入終止液之后需要立即讀數(shù)。

?

重要聲明：

1）??因細(xì)胞種類繁多和實(shí)驗(yàn)體系不同，細(xì)胞脫落不在本試劑盒質(zhì)量投訴范圍中；

2）??數(shù)據(jù)處理方法不在本產(chǎn)品投訴范圍中；

3）??*本試劑僅用于實(shí)驗(yàn)室科研使用。