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Worthington解離酶:膠原酶及四個(gè)基本概況

2022-07-29 14:27 作者:艾美捷  | 我要投稿

1959?年,Worthington?提供了個(gè)商業(yè)上可用的膠原酶。當(dāng)時(shí)其提供了一種粗酶,并只測試了膠原酶的活性。最終,在研究界許多人的合作下,確定了四個(gè)基本概況:

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艾美捷Worthington?膠原酶解離酶背景:

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細(xì)菌膠原酶是含有膠原酶的粗復(fù)合物,更準(zhǔn)確地稱為梭菌肽酶?A,它是一種蛋白酶,對序列?Pro-X-Gly-Pro?中的?X-Gly?鍵具有特異性,其中?X?最常見的是中性氨基酸。這種序列經(jīng)常在膠原蛋白中發(fā)現(xiàn),但在其他蛋白質(zhì)中很少見。雖然許多蛋白酶可以水解單鏈、變性的膠原蛋白多肽,但梭菌肽酶?A?在蛋白酶中是獨(dú)一無二的,因?yàn)樗軌蚬艉徒到饨Y(jié)締組織中常見的三螺旋天然膠原原纖維。

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真正的膠原酶可以同時(shí)切割所有三個(gè)鏈或攻擊單鏈。哺乳動(dòng)物膠原酶在特定位點(diǎn)以天然三螺旋構(gòu)象分裂膠原蛋白,產(chǎn)生片段?TC A?和?TC B,代表原膠原分子的?3/4?和?1/4?長度。碎片化后,這些片段傾向于展開成隨機(jī)多肽,并且更容易受到其他蛋白酶的攻擊。

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細(xì)菌膠原酶通常從宿主侵入菌株中提取。這些酶與哺乳動(dòng)物膠原酶的不同之處在于它們攻擊螺旋上的許多位點(diǎn)。Mandl?等人首先制備的來自溶組織梭菌的膠原酶已經(jīng)得到了最徹底的研究。市售膠原酶主要限于來自Cl?的膠原酶。盡管最近有其他來源可用。梭菌膠原酶還優(yōu)先降解天然膠原蛋白中的螺旋區(qū)域,優(yōu)先在?Pro-X-Gly-Pro?序列中的?X-Gly?鍵處,其中?X?最常見的是中性氨基酸。合成肽底物中的這種鍵也可能被分裂。

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由于所有膠原多肽的不完全水解及其對細(xì)胞外基質(zhì)中發(fā)現(xiàn)的高濃度非膠原蛋白和其他大分子的有限活性,單獨(dú)純化的梭菌肽酶?A?通常在解離組織方面效率低下。最常用于組織解離的膠原酶是含有梭菌肽酶?A?以及許多其他蛋白酶、多糖酶和脂肪酶的粗制品。粗膠原酶非常適合組織解離,因?yàn)槌怂饨Y(jié)締組織和上皮組織的細(xì)胞外基質(zhì)中的其他蛋白質(zhì)、多糖和脂質(zhì)的酶之外,它還含有攻擊天然膠原蛋白和網(wǎng)狀纖維所需的酶。

現(xiàn)在,艾美捷Worthington?的這四種情況分別是:

1、類型?1包含平均數(shù)量的測定活性(膠原酶、酪蛋白酶、梭菌蛋白酶和胰蛋白酶活性)。一般推薦用于上皮、肝、肺、脂肪和腎上腺組織細(xì)胞的制備。

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2、2?型含有更大的梭菌蛋白酶活性。它通常用于心臟、骨骼、肌肉、甲狀腺和軟骨。

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3、選擇3?型是因?yàn)榈鞍姿饣钚缘?。它通常用于乳腺?xì)胞。

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4、選擇4?型是因?yàn)橐鹊鞍酌富钚缘汀KǔS糜谝葝u和其他受體完整性至關(guān)重要的應(yīng)用。

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2007?年推出的無動(dòng)物源膠原酶(代碼?CLSAFA)源自在完全不含動(dòng)物成分的培養(yǎng)基中生長的培養(yǎng)物,專為必須防止引入潛在動(dòng)物源性病原體的生物加工應(yīng)用而設(shè)計(jì)。二級蛋白酶的水平與?1?型和?2?型相似。

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不同組織的類型和有效性之間的相關(guān)性很好,但并不完美,部分原因是使用參數(shù)可變。然而,大多數(shù)研究人員認(rèn)為粗膠原酶批次的組織分型是一項(xiàng)有價(jià)值的服務(wù)。Worthington?膠原酶檢測的詳細(xì)描述以及梭菌肽酶?A?檢測程序可在Worthington?酶手冊中找到。

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寫在最后:如果你找到適合你的細(xì)胞分離程序的膠原酶類型之一,你可能想嘗試?Worthington?的膠原酶采樣程序。這個(gè)免費(fèi)的程序讓研究人員可以對不同批次的膠原酶進(jìn)行預(yù)采樣,并在其特定應(yīng)用中對其進(jìn)行評估,以實(shí)現(xiàn)細(xì)胞產(chǎn)量和活力的最佳組合。

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Worthington核心酶:包括:膠原蛋白酶,脫氧核糖核酸酶I,彈性蛋白酶,木瓜蛋白酶,核糖核酸酶,胰蛋白酶等。

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Worthington主要研究覆蓋生物技術(shù)和生命科學(xué)研究,診斷,生物制藥和生物加工應(yīng)用的高質(zhì)量純化酶,蛋白質(zhì),核酸和試劑盒。艾美捷科技是Worthington的中國代理商,為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù)。


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