2.RNA瓊脂糖凝膠電泳實驗原理
? ? ? RNA電泳實驗可以在變性以及非變性兩種條件下進行。非變性電泳實驗一般使用的1.0%--1.4%的凝膠，使不同的RNA條帶也能分開，但通過該實驗是無法判斷其分子量。只有在RNA完全變性的條件下時，RNA的泳動率才會與分子量對數(shù)呈線性的關(guān)系。如果要測定RNA分子量時，必須要用變性凝膠。當然需要快速檢測所提總RNA樣品完整性時，配制普通1%瓊脂糖凝膠即可滿足實驗要求。

3.RNA瓊脂糖凝膠電泳實驗所需的材料、器具、試劑
? ? ? ? 蘑菇的總RNA溶液。 電泳儀，電泳槽，電子天平，移液器，槍頭，微波爐，紫外透射檢測儀等。 瓊脂糖，1XTAE電泳緩沖液，0.5μg/ml溴化乙錠（EB）10X載樣緩沖液。

4.RNA瓊脂糖凝膠電泳實驗實驗步驟

• 用1×TAE電泳緩沖液制作瓊脂糖凝膠，加1×TAE電泳緩沖液至液面覆蓋凝膠。

• 在超凈工作臺上，用移液器吸取總RNA樣品4μl于封口膜上。在實驗臺上再加入5μl 1×TAE電泳緩沖液及1μl 的10X載樣緩沖液，混勻后，小心加入點樣孔。

• 打開電源開關(guān)，調(diào)節(jié)電壓至100V，使RNA由負極向正極電泳，約30min后將凝膠放入EB染液中染色5min,用清水稍微漂洗。在紫外透射檢測儀上觀察RNA電泳結(jié)果。

5. 對RNA的變性瓊脂糖凝膠進行檢測：
實驗所需試劑：
a.MOPS緩沖液（10x）:0.4mol/L;嗎啉代丙烷磺酸（MOPS） (Ph7.0);0.1mol/L NaAc;10mol/L EDTA;
b.上樣需要的染料：50%甘油；1mol/L EDTA；0.4%溴酚藍，0.4%二甲苯藍;
c.甲醛;
d.去離子甲酰胺，電泳槽清洗過程：去污劑洗干凈（一般長時間浸泡過夜）—水沖洗—乙醇干燥—3%H2O2灌滿——室溫放置10分鐘—0.1%DEPC水沖洗。

6. 實驗操作步驟：
（1） 將制膠用具用70%乙醇沖冼一遍，晾干備用。
（2） 配制瓊脂糖凝膠。
? ? ? ? ①稱取0.5g瓊脂糖，置干凈的100ml 錐形瓶中，加入40ml蒸餾水，微波爐內(nèi)加熱使瓊脂糖徹底溶化均勻。
? ? ? ? ②待膠涼至60--70 ℃，依次向其中加入9ml 甲醛、5ml 10X MOPS緩沖液和0.5ul 溴化乙錠，混合均勻。
? ? ? ? ③灌制瓊脂糖凝膠。
（3） 樣品準備：
? ? ? ?① 取 DEPC處理過的500ul小離心管，依次加入如下試劑： 10x MOPS緩沖液2ul，甲醛3.5ul,甲酰胺（去離子）10ul，RNA 樣品 4.5ul,混勻。
? ? ? ?② 將離心管置于60℃水浴中保10分鐘，再置冰上2分鐘。
? ? ? ?③ 向管中加入3ul 上樣染料，混勻。
（4）上樣。
（5）電泳：電泳槽內(nèi)加入1XMOPS緩沖液，于7.5V/ml 的電壓下電泳。
（6）電泳結(jié)束后，在紫外燈下檢查結(jié)果。

7. 案例：

Agarose gel electrophoresis showing total RNA extracted from P. orientalis leaves using five RNA isolation methods: CTAB method (lane 1), SDS method (lane 2), TRIzol method (lane 3), plant RNAout kit protocol (lane 4), and Improved plant RNAout kit protocol (lane5).??