質(zhì)譜分析在磷酸化分析中起著重要作用，可用于磷酸化蛋白質(zhì)的位點鑒定和定量分析等。百泰派克生物科技提供蛋白磷酸化位點質(zhì)譜檢測服務(wù)。

磷酸化和磷酸化位點

磷酸化是細(xì)胞信號通路中重要的共價翻譯后修飾（PTM）。該修飾是可逆的，并且由蛋白激酶催化。研究表明，超過30％的真核蛋白質(zhì)會發(fā)生磷酸化。磷酸化修飾主要對靶蛋白具有兩種調(diào)節(jié)機制：（1）磷酸化可能會導(dǎo)致修飾的蛋白質(zhì)（例如酶和受體）的結(jié)構(gòu)發(fā)生構(gòu)象變化，從而“開啟”或“關(guān)閉”其功能；（2）磷酸化改變了蛋白質(zhì)與其效應(yīng)子的親和力，使磷酸化的蛋白質(zhì)可以募集或釋放其下游效應(yīng)子。磷酸化修飾可以調(diào)節(jié)廣泛的生物學(xué)活性，例如細(xì)胞生長、細(xì)胞代謝、細(xì)胞分裂等等。

在真核生物中，磷酸化可能發(fā)生在絲氨酸、蘇氨酸、酪氨酸和組氨酸等殘基上。鑒定特定目標(biāo)蛋白質(zhì)的磷酸化位點以及蛋白質(zhì)組中更廣泛的磷酸化位點對于全面研究蛋白質(zhì)磷酸化的功能作用和分析信號網(wǎng)絡(luò)很重要。

磷酸化位點的質(zhì)譜檢測

質(zhì)譜是用于鑒定蛋白質(zhì)磷酸化位點的技術(shù)之一，常與液相色譜聯(lián)用。在基于質(zhì)譜的磷酸化位點檢測中，蛋白質(zhì)樣品先由蛋白酶消化成肽段。由于與未修飾的肽相比，磷酸化的肽的化學(xué)計量水平低，因此需要對磷酸化的肽進(jìn)行富集后再進(jìn)行液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（LC-MS/MS）分析。串聯(lián)質(zhì)譜會測量完整的肽質(zhì)量和碎片離子質(zhì)量，利用生物信息學(xué)分析通過將這些實驗數(shù)據(jù)與從序列數(shù)據(jù)庫得出的理論光譜進(jìn)行匹配來實現(xiàn)磷酸化位點分析。