1.取材固定:離體的組織不及時(shí)固定，組織就會(huì)自溶,抗原就會(huì)擴(kuò)散。固定就是加入一些可以讓蛋白質(zhì)變性的物質(zhì)(比如說(shuō)甲醛),使得蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)被固定住，不再發(fā)生變化,同時(shí)也不會(huì)再發(fā)生一些活性反應(yīng)，這樣才好做后續(xù)的染色步驟。常見(jiàn)固定液是 4%的多聚甲醛和飽和苦味酸。根據(jù)不同目的、組織特征代表性取材。取的材料應(yīng)該小而薄。便于固定劑迅速滲入內(nèi)部，一般厚度不超過(guò) 2mm，大小不超過(guò) 5x5mm2。每個(gè)組織最好多切幾塊新鮮組織古定(組織塊不宜太大太厚，這樣固定液很難進(jìn)入里面，可能會(huì)導(dǎo)致在較短的時(shí)間內(nèi)脫水不完全，引起一系列的問(wèn)題，比如浸蠟不徹底，切片不好完成，切不完整。導(dǎo)致后來(lái)切片染色的脫落，造成染色的失敗,組織塊也不能大小,否則不能保證切片數(shù)量，且透明時(shí)間和浸蠟時(shí)間不能很好的把握著固定時(shí)間因固定劑種類(lèi)而是大多 6-12 小時(shí),一般不超過(guò) 12 小時(shí)。視組織固定的難易程度而定。后續(xù)如果做免疫組化，不應(yīng)超過(guò) 12 小時(shí);后續(xù)如果做 HE 染色，不應(yīng)超過(guò) 24 小時(shí)。固定完之后用水洗(目的:洗去滲入組織的固定液,終止固定以免影響對(duì)組織的內(nèi)結(jié)構(gòu)的觀察，分析。換液兩次，一次半小時(shí)。)之后可直接脫水包埋或放入 75%的乙醇4度可長(zhǎng)期保存
2.脫水:從75%的乙醇中取出，分別放到80%，90%,100%(Ⅰ)的乙醇中半小時(shí)，再放入100%乙醇中15min。固定完直接水洗包埋的,應(yīng)從 70%乙醇開(kāi)始，易碎組織從 50%乙醇開(kāi)始。組織脫水時(shí)間不應(yīng)過(guò)長(zhǎng)，尤其是高濃度乙醇,要特別注意控制時(shí)間
3.透明:透明的目的是置換組織內(nèi)的脫水劑,為下一步浸蠟起到橋梁作用，二甲苯可以去除脂肪,乙醇+二甲米(1:1)2h:二甲苯（Ⅰ），二甲苯（Ⅱ）各10min(根據(jù)組織的大小和透明的難易程度不同，透明的時(shí)間回以根據(jù)具體情況調(diào)整,顏色淺的組織表面油亮，可以透過(guò)光時(shí)效果較好，顏色較深的組織至少邊緣可以透光。類(lèi)似于風(fēng)干的杏肉。)
4.浸蠟:浸蠟?zāi)康氖侵脫Q組織中的透明劑,為包埋作準(zhǔn)備。二甲苯+石蠟(1:1)2h;石蠟(Ⅰ)1h;石蠟(Ⅱ)2h。(浸蠟的時(shí)間也可以長(zhǎng)一些)
5.包埋:在冰盒上進(jìn)行，將融好的純蠟(最好提前4小時(shí)以上開(kāi)始融蠟，新蠟更難融)倒入蠟盒(可以浸沒(méi)組織就行，大約蠟盒的三分之一)由于蠟盒底部與冰盒接觸，底部的蠟會(huì)先凝固,這樣就可以把組織用鑷子夾住立在底部。然后繼續(xù)將蠟盒倒?jié)M，便干切片機(jī)夾住蠟塊。待蠟塊完全凝固，包埋完成。