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細(xì)胞培養(yǎng)對無菌環(huán)境的要求較為嚴(yán)格。對于細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室來說，最重要的是杜絕一切可能的污染源。

一、首先我們先來普及一下細(xì)胞房常見的污染分類如下：

1細(xì)菌污染

特征：大小在0.5~5 μm，比動物細(xì)胞小很多。多呈球狀或桿狀，形態(tài)規(guī)則，分布均勻；增殖速度快，一般污染后48~72小時爆發(fā)式增殖；營養(yǎng)消耗快，培養(yǎng)基很快變黃，變渾濁；鏡下觀察有明顯的定向運(yùn)動。

處理方法：輕度污染可用10X雙抗清洗處理，重度污染建議消殺后丟棄。

2真菌污染

特征：呈鏈球狀或絲狀。常形成肉眼可見的菌落，培養(yǎng)基顏色無變化或變紫，僅對局部細(xì)胞影響較大，其他地方生長正常。會形成孢子，容易污染其他細(xì)胞。

處理方法：真菌污染較難根除，不建議保留，建議消殺后丟棄。

3支原體污染

特征：最小的微生物，無法通過光學(xué)顯微鏡看見，但可通過電鏡觀察到。感染支原體的細(xì)胞，在某一時間點(diǎn)碎片突然增多，隨著傳代，細(xì)胞狀態(tài)顯著變差。支原體污染可通過氣溶膠傳播，影響同一細(xì)胞房其他細(xì)胞。

鑒定方法：PCR法、顯色法、熒光染色法等。

處理方法：若細(xì)胞狀態(tài)尚可，添加支原體抑制劑培養(yǎng)2-3代可轉(zhuǎn)陰；若細(xì)胞狀態(tài)很差，建議消殺后丟棄。

4黑膠蟲污染

特征：無明確定義，鏡下無法直接觀察到。主要表現(xiàn)為細(xì)胞狀態(tài)差，黑點(diǎn)和碎片多，布朗運(yùn)動。通過檢測發(fā)現(xiàn)主要為支原體污染，部分為未知的增殖不明顯的微生物污染。

處理方式：若細(xì)胞狀態(tài)尚可，添加黑膠蟲/支原體抑制劑培養(yǎng)2-3代可轉(zhuǎn)陰；若細(xì)胞狀態(tài)很差，建議消殺后丟棄。

5細(xì)胞交叉污染

特征：即不同的細(xì)胞混雜在一起

鑒定方法：

同種屬：STR鑒定，多等位基因數(shù)大于3個。

（需考慮本身的遺傳背景，如EA.hy 926為融合細(xì)胞，本身就包含兩套遺傳信息）

不同種屬：PCR法，對種屬特異性基因進(jìn)行擴(kuò)增，不同種屬產(chǎn)物大小不同。

處理方法：建議重新引種。

不管發(fā)生哪種類型的污染都會造成相同的結(jié)果。即必須重新做實(shí)驗(yàn)，因此浪費(fèi)工作時間，增加實(shí)驗(yàn)成本，降低實(shí)驗(yàn)重復(fù)性。而且以污染細(xì)胞和未污染細(xì)胞為基礎(chǔ)進(jìn)行試驗(yàn)時，有可能得到的實(shí)驗(yàn)結(jié)果完全不同。更為嚴(yán)重的是，如果你所研究的細(xì)胞是另外一種細(xì)胞的話，那所做的所有工作可能會一文不值。

二、細(xì)胞污染后的處置

細(xì)胞一旦發(fā)現(xiàn)有污染出現(xiàn)，應(yīng)及時對所用試劑和耗材進(jìn)行清理。耗材可更換新的或者重新高壓滅菌，試劑可重新過濾除菌或者更換新批次，操作臺和細(xì)胞房需用消毒液進(jìn)行全面清潔消殺后方可復(fù)蘇新的細(xì)胞，以免反復(fù)出現(xiàn)污染。

污染防治策略

環(huán)境要求：

潔凈區(qū)10000級，局部100級，定期進(jìn)行沉降菌檢測

環(huán)境消毒：每周一次定期消毒滅菌

1）?地面/墻面：84消毒液、新潔爾滅交叉使用，或采用殺孢子劑進(jìn)行噴灑

2）?環(huán)境消毒：定期紫外照射，臭氧熏蒸，采用殺孢子進(jìn)行空間霧化

3）?儀器設(shè)備表面：75%酒精擦拭，或采用殺孢子劑進(jìn)行噴灑

三、一種新型的細(xì)胞間消毒方式

潤聯(lián)環(huán)保旗下品牌KV-3000過氧化氫干霧滅菌器源于歐盟GMP設(shè)計(jì)，自身符合潔凈區(qū)凈化要求，不帶入任何外源污染的同時高效根除潔凈室空間微生物，達(dá)到無菌凈化的目標(biāo)。采用了全球最先進(jìn)的霧化技術(shù)，霧化顆粒小于3微米，增效了空間擴(kuò)散均勻性，迅速彌漫充滿整個密閉空間不放過每一處死角，滅菌效果堪佳，其均勻性、無殘留及對機(jī)器無傷害特征非常吻合細(xì)胞房環(huán)境消毒及培養(yǎng)箱里面消毒。

原理是：潤聯(lián)環(huán)保KV-3000干霧滅菌設(shè)備采用獨(dú)到而特殊的結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)，使得在僅僅輸入電能的情況下，集壓縮、ventur噴射和霧滴內(nèi)外部濺射碎化功能于一體，使專用液態(tài)殺孢子劑變成氣霧狀態(tài)極微小顆粒噴出，高速極小微粒與空氣接觸后充分氣化，變成氣態(tài)過氧化氫即為“干霧”。

潤聯(lián)環(huán)保KV-3000過氧化氫滅菌優(yōu)勢：

1、殺菌效果好，對嗜熱脂肪桿菌芽孢有6個對數(shù)值的殺滅率；

2、廣譜的殺菌能力，能殺滅包括支原體、真菌、病毒及芽孢在內(nèi)的200多種微生物，滅菌原理特殊；

3、平均5um干霧顆粒，擴(kuò)散性優(yōu)良，迅速并持續(xù)的將殺孢子劑擴(kuò)散到每一個角落，在空氣中做不規(guī)則布朗運(yùn)動；

4、性能穩(wěn)定，非電加熱原理，降低了高溫容易損壞設(shè)備的風(fēng)險(xiǎn)；

5、所采用的殺孢子劑，無色無毒，無殘留，安全可靠，完全分解為氧氣和水；

6、驗(yàn)證資料齊全，滅菌設(shè)備和所采用的試劑均在中國有備案，帶CANS認(rèn)證的檢測報(bào)告；

7、滅菌時間短，2-3個小時可完成整個滅菌流程，高效節(jié)能；

8、設(shè)備體積小，操作方便，靈活移動滿足不同空間需求，同時適應(yīng)大空間滅菌；

9、性價比高，節(jié)約消毒成本；

細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室消毒服務(wù)提供

潤聯(lián)環(huán)保，專注消毒產(chǎn)品和消毒方案，十余年來服務(wù)國內(nèi)眾多的近科研單位，疾控實(shí)驗(yàn)室，制藥企業(yè)，大學(xué)實(shí)驗(yàn)室等，可為您企業(yè)量身打造消毒方案！

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