取材：這一步就是取你自己想染的組織了，病人的，小鼠的等等

取下來就可以了，我這里用的是做成球?qū)嶒灥男∏颉境汕驅(qū)嶒灥牟襟E我還沒更(^///^)】

?先就這樣記錄著吧

包埋：1.先把皿中的小球吸到離心管中（膠有點粘，建議把槍頭剪一下再洗）

????????????2.加1ml或者2mlPBS? 1000rpm，5min洗一次（勿吹打，小球會散）

????????????3.加4％多聚甲醛常溫固定一小時

????????????4.加1mlPBS1000rpm，5min洗一次（勿吹打，小球會散）

????????????5.滴加包埋OCT冰凍包埋劑

????????????6.準備好包埋模具，不要混勻（因為球比較小且少，混勻的話，會直接無了），直接快準狠的吸出來滴到包埋模具中

冰凍切片：就是切片，操作那個冰凍切片機

免疫熒光染色：

????????????1.從-80拿出切片，拿出即用免疫筆畫圈（因為不是組織，會找不到位置）

????????????2.室溫放置10分鐘

????????????3.PBS洗三次

????????????4.加破膜劑（0.1％的PBSTx）10分鐘，然后PBS洗兩次

????????????0.1％的PBSTx：PBS加0.1％的Triton X-100

????????????5.加5％的BSA（用0.1％PBST配的）常溫封閉一小時

????????????0.1％PBST：PBS加0.1％的吐溫

? ? ? ? ? ? 6.??加一抗，37°30min

? ? ? ? ? ? 7.??PBS洗三次

????????????8.加二抗，37°30min

????????????PS：二抗帶熒光要注意避光，防止猝滅，有一些一抗是自帶熒光的，不需要二抗，如果是多重免疫熒光的話，

?????????????????注意波長不要重疊，還有就是種屬問題

? ? ? ? ? ? 9. PBS洗三次

? ? ? ? ? ?10.加dapi封片