什么是細胞自噬？

簡單的說就是“吃掉自己”。是真核生物中進化保守的對細胞內(nèi)物質(zhì)進行周轉(zhuǎn)的重要過程。

該過程中一些損壞的蛋白或細胞器被雙層膜結(jié)構(gòu)的自噬小泡包裹后，送入溶酶體(動物)或液泡(酵母和植物)中進行降解并得以循環(huán)利用。自噬包括生理條件下的基礎(chǔ)型自噬和應(yīng)激條件下的誘導(dǎo)型自噬。研究表明，自噬能在細胞穩(wěn)態(tài)、衰老、免疫、腫瘤發(fā)生及神經(jīng)退行性疾病等多種生理病理過程中發(fā)揮重要作用。

LC3（自噬標志物）

是微管相關(guān)蛋白輕鏈3(MAP1LC3)的簡稱，它貫穿整個自噬過程，哺乳動物的LC3可分為三種：LC3A、LC3B和LC3C。

自噬發(fā)生時，LC3 蛋白合成后立即在其羧基端被 Atg4 所剪切，產(chǎn)生細胞漿定位的 LC3-I。在自噬過程中，LC3-I 會被包括 Atg7 和 Atg3 在內(nèi)的泛素樣體系所修飾和加工，產(chǎn)生分子量為 14kD 的 LC3-II，并定位到自噬小體中。

LC3-II 的含量和發(fā)生自噬的程度成正比，LC3-II/I比值的大小可估計自噬水平的高低。

得益于熒光蛋白技術(shù)的發(fā)展，我們可以通過熒光蛋白標記的方式，直觀的看到自噬現(xiàn)象和過程。

自噬病毒工具，便于直接感染目的細胞后直觀地觀察細胞自噬的整體水平。

自噬單熒光標記慢病毒

吉滿自主研發(fā)出單熒光(綠光或紅光)標記的自噬指示產(chǎn)品，當(dāng)細胞內(nèi)沒有自噬發(fā)生時，熒光-LC3融合蛋白會均勻地分散在細胞質(zhì)中，一旦細胞發(fā)生自噬活動，熒光-LC3融合蛋白就會聚集并轉(zhuǎn)位到自噬體膜，此時在熒光顯微鏡下可清晰地觀察到明亮的熒光斑點，斑點數(shù)量的多少就代表了自噬活動的強弱。

自噬雙熒光標記慢病毒

吉滿自主研發(fā)的雙熒光自噬慢病毒，可用于標記及追蹤LC3以及自噬流的變化。其中GFP是酸敏感型GFP蛋白，而mRFP是穩(wěn)定的熒光表達基團，不受外界影響。由于自噬小體進入第二階段后，與溶酶體進行融合，形成自噬溶酶體。由于自噬溶酶體內(nèi)的酸性環(huán)境，導(dǎo)致PH下降，GFP淬滅，因此，GFP的減弱表明溶酶體與自噬小體融合形成了自噬溶酶體。而mRFP是一直穩(wěn)定表達的，因而可以通過GFP與mRFP的亮點比例來評價自噬流進程。

產(chǎn)品清單

引文展示

案例一：Irisin ameliorates doxorubicin-induced cardiac perivascular fibrosis through inhibiting endothelial-to-mesenchymal transition by regulating ROS accumulation and autophagy disorder in endothelial cells

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使用pGMLV-GFP-LC3 慢病毒(Genomeditech Co., Ltd.)感染CMEC細胞，使用熒光顯微鏡觀察經(jīng)過DOX和Irisin處理的CMEC細胞發(fā)現(xiàn)(圖O-R)，Irisin可以促進CMEC細胞自噬的形成，并且可以部分挽救CMEC細胞中因DOX造成的自噬紊亂。

案例二：N6-methyladenosine modification regulates ferroptosis through autophagy signaling pathway in hepatic stellate cells

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使用CMV-TurboRFP-EGFP-LC3-PGK-Puro和 pGM-CMV-GFP-hLC3(Genomeditech Co., Ltd.)病毒感染HSC-LX2細胞，erastin (10μM)處理24小時后，通過觀察RFP-GFP-LC3斑點形成發(fā)現(xiàn)(如圖所示)，過表達FTO和敲低METTL4可以顯著抑制HSC-LX2細胞鐵死亡過程中的自噬流。

案例三：Obatoclax and LY3009120 Efficiently Overcome Vemurafenib Resistance in Differentiated Thyroid Cancer

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本研究使用GFP-RFP-LC3(Genomeditech Co., Ltd.)病毒感染K1細胞，通過共聚焦顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)(圖A)，1 μM Obatoclax處理K1細胞24h后，GFP-RFP-LC3陽性自噬斑點顯著增加；TEM觀察表明(圖B)，Obatoclax處理后，K1細胞出現(xiàn)與溶酶體共定位的自噬囊泡形成，并且損傷的溶酶體或大泡明顯增加，間接表明Obatoclax中和了溶酶體。

吉滿生物科技（上海）有限公司成立于2011年，是專業(yè)從事生物科技前沿技術(shù)研發(fā)的高新技術(shù)企業(yè)。以病毒包裝為基礎(chǔ)，密切關(guān)注行業(yè)最前沿的科研進展，十一年深耕細作，創(chuàng)建了具有自主知識產(chǎn)權(quán)的分子生物學(xué)、細胞生物學(xué)、慢病毒、腺相關(guān)病毒、報告基因五大技術(shù)平臺。

2020年成立了專業(yè)細胞系子品牌DDXCELL，提供報告基因檢測、病毒包裝、工程細胞株構(gòu)建，基因編輯及藥物篩選評價等技術(shù)服務(wù)及相關(guān)產(chǎn)品。

2022年載體品牌“載體通·Genovector”煥新升級，同時推出全新試劑品牌“優(yōu)試劑·Genoagent”，貫穿科研始末。

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