醫(yī)學(xué)上通常用裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)來(lái)研究腫瘤及其治療：用帶有人源移植瘤的裸鼠來(lái)試可能的靶向藥物，可以在腫瘤復(fù)發(fā)之前都找到真正有效的靶向藥物。裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)，即在裸鼠皮下注入腫瘤細(xì)胞，觀察腫瘤的形成、發(fā)展及抗腫瘤藥物的效果。

今天中洪菌以Hep-G2細(xì)胞為例，介紹裸鼠皮下成瘤的實(shí)驗(yàn)小技巧及問(wèn)題解答！

一、接種步驟

1、 ?接種是選好進(jìn)針部位，大部分選擇腋下接種，接種前用75%的酒精對(duì)進(jìn)針部位擦拭消毒。

2、 ?排去一次性針頭內(nèi)空氣，從進(jìn)針部位向前穿刺大約1cm，進(jìn)行皮下注射。

3、 ?注射時(shí)，每次注射量大約為0.2ml，每日觀察。

4、 ?注射完畢后，緩慢退出針頭，盡量避免漏液；

5、 注射過(guò)程中，細(xì)胞需一直置于冰上，使細(xì)胞處于比較低的代謝狀態(tài)，并盡量在半小時(shí)內(nèi)完成。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果：一般接種7-10天后便可看到腫塊長(zhǎng)起；

二、操作小技巧

1、細(xì)胞的狀態(tài)是成瘤實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵，所以細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)一定要好，取處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，細(xì)胞達(dá)80-90%左右密度為宜。收集細(xì)胞前一天晚上更換新鮮培養(yǎng)基；

2、注射向前方穿行，注射前針頭稍微動(dòng)一動(dòng)，能動(dòng)說(shuō)明在皮下，否則可能在皮內(nèi)或者肌肉內(nèi)；

3、注射前，要排去針管內(nèi)的空氣；

4、針頭在皮下走一段再注射，速度不可太快

5、接種點(diǎn)離進(jìn)針點(diǎn)盡量1cm遠(yuǎn)，減少漏液和污染的可能；

三、常見(jiàn)問(wèn)題及解答

一、這個(gè)實(shí)驗(yàn)為什么用裸鼠而不用普通的老鼠或者小白鼠？

裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)用的裸鼠，最大的特點(diǎn)是沒(méi)有胸腺等免疫器官，它的免疫力幾乎為０，對(duì)腫瘤細(xì)胞沒(méi)有免疫作用，易于成瘤。

自然狀態(tài)下的老鼠和小白鼠有完整的免疫系統(tǒng)。免疫系統(tǒng)有免疫防御、免疫自穩(wěn)、免疫監(jiān)視三大生理功能，并通過(guò)免疫識(shí)別和免疫排斥攻擊兩大生理反應(yīng)起作用。具有完整免疫系統(tǒng)的老鼠和小白鼠，會(huì)通過(guò)免疫識(shí)別反應(yīng)來(lái)識(shí)別自己與非己，發(fā)現(xiàn)注入的腫瘤細(xì)胞這種非己抗原后，會(huì)啟動(dòng)免疫排斥攻擊反應(yīng)進(jìn)行殺滅，這樣腫瘤就很難形成，實(shí)驗(yàn)就難以進(jìn)行下去。

二、小鼠瘤子長(zhǎng)起來(lái)又消失？

腫瘤塊先縮小，后變大很常見(jiàn)，很可能是炎癥反應(yīng)，腫瘤細(xì)胞被小鼠自身吸收，繼續(xù)觀察腫瘤細(xì)胞吸收之后是否經(jīng)過(guò)幾周還能長(zhǎng)出來(lái)，長(zhǎng)不起來(lái)建議換鼠。

三、如何抓牢裸鼠?

可以用左手拇指和食指捏緊裸鼠頸背部皮膚，小拇指夾住裸鼠尾巴，然后進(jìn)行接種。

四、是否可以在一只小鼠進(jìn)行多個(gè)點(diǎn)荷瘤？

不可以，一只老鼠就只能接種一個(gè)點(diǎn)。因?yàn)橐粋€(gè)老鼠身上有多個(gè)腫瘤塊的情況下，可能會(huì)相互影響。

五、腫瘤長(zhǎng)不出來(lái)是怎么回事？

第一：腫瘤生長(zhǎng)周期很慢，一周開(kāi)始生長(zhǎng)腫塊，大約需要1~2個(gè)月才能長(zhǎng)成腫瘤。

第二：可能是細(xì)胞狀態(tài)差，活力不好，或是腫瘤細(xì)胞不易成瘤，需加入Matrigel輔助或增大接種量或更換細(xì)胞系；

第三：一方面可能是小鼠周齡太大，或小鼠免疫排斥，建議更換免疫缺陷程度更大的小鼠（Nod-scid小鼠，NOG小鼠＞Nude裸鼠）

六、腫瘤體積相差很大，大小不一？

首先，不是所有的腫瘤都能夠長(zhǎng)得均一形態(tài)規(guī)則。

其次，荷瘤分組發(fā)現(xiàn)小鼠腫瘤體積差距很大，這可能跟小鼠周齡及接種細(xì)胞量不一致導(dǎo)致，建議重新做實(shí)驗(yàn)分組。

最后，一般構(gòu)建腫瘤模型，裸鼠主要保證周齡，周齡小一點(diǎn)好。

總之，裸鼠成瘤概括來(lái)說(shuō)就是，大膽的接種，勤觀察，勤記錄，一定要仔細(xì)記錄！