活體轉(zhuǎn)染系列軟文第二彈來(lái)啦~

癌細(xì)胞代謝途徑中的關(guān)鍵蛋白VDAC1與表觀遺傳的聯(lián)系

上一期我們介紹了活體轉(zhuǎn)染技術(shù)并通過(guò)文獻(xiàn)介紹了體內(nèi)轉(zhuǎn)染試劑的具體應(yīng)用，也收到了很多讀者的咨詢，那么本期小編繼續(xù)通過(guò)通過(guò)文獻(xiàn)來(lái)看一下體內(nèi)轉(zhuǎn)染試劑在其他方面的應(yīng)用。

本期給大家?guī)?lái)的這篇文獻(xiàn)于2020年發(fā)表在Cancer上，主要內(nèi)容是線粒體蛋白VDAC1的消耗對(duì)于腫瘤細(xì)胞的影響是通過(guò)代謝-表觀遺傳學(xué)軸介導(dǎo)的。

在之前的研究中就發(fā)現(xiàn)無(wú)論是體外還是體內(nèi)將人的VDAC1沉默（si-hVDAC1），可以抑制各種類型實(shí)體瘤的生長(zhǎng)。本文主要為了研究si-VDAC1治療膠質(zhì)母細(xì)胞瘤對(duì)表觀遺傳相關(guān)基因表達(dá)的影響。

首先選取無(wú)胸腺 8 周齡雄性裸鼠，皮下接種U-87MG 膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞到無(wú)胸腺 8 周齡雄性裸鼠的后腿側(cè)面，誘導(dǎo)腫瘤發(fā)生。當(dāng)腫瘤體積 達(dá)到約60–100 mm3時(shí)，隨機(jī)將小鼠分為腫瘤體積相當(dāng)?shù)膬山M。siRNA 和體內(nèi)轉(zhuǎn)染試劑（in vivo-jetPEI?，Polyplus）分別加入 5% 葡萄糖溶液中，并混合在一起。在室溫下孵育 15 分鐘后，將siRNA/in vivo-jetPEI? 復(fù)合物注射到小鼠體內(nèi)。每組小鼠每三天進(jìn)行siRNA（si-hVDAC1）或陰性對(duì)照（si-NT）的瘤內(nèi)注射，至終濃度達(dá)到75nM。在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，人道處決小鼠，切除腫瘤并測(cè)量計(jì)算的平均腫瘤體積。測(cè)量結(jié)果表明注射siRNA的動(dòng)物模型中獲得的腫瘤的體積與陰性對(duì)照相比顯著下降（圖1A）。

此外qRT-PCR（圖1B）與WB（圖 1C、D）的檢測(cè)VDAC1的水平，結(jié)果均表明si-hVDAC1處理的腫瘤中VDAC1的水平較陰性對(duì)照相比顯著下調(diào)。

接著，為了分析si-VDAC1處理的腫瘤對(duì)表觀遺傳相關(guān)基因表達(dá)的影響，IHC（圖 1E、F）和 qPCR（圖 1G）檢測(cè)陰性對(duì)照和 siRNA處理的腫瘤中代謝相關(guān)酶的表達(dá)水平。 結(jié)果表明，所有測(cè)試蛋白質(zhì)的表達(dá)水平在 si-hVDAC1處理的腫瘤中均下調(diào)，這與糖酵解和氧化磷酸化 (OXPHOS) 的改變一致。?

接下來(lái)作者通過(guò)DNA?microarrays結(jié)合生信分析對(duì)si-VDAC1處理的腫瘤中差異表達(dá)基因進(jìn)行了功能分析。結(jié)果表明差異基因集中在關(guān)鍵功能和途徑，包括代謝、生物合成和發(fā)育過(guò)程，生物調(diào)控和表觀遺傳過(guò)程等（Fig2）。

接著，作者又通過(guò)qRT-PCR 、WB驗(yàn)證si-VDAC 1處理的腫瘤的表觀遺傳學(xué)的相關(guān)修飾。結(jié)果表明膠質(zhì)母細(xì)胞瘤中VDAC1 的消耗使得與代謝重新編程和表觀遺傳景觀改變相關(guān)的基因表達(dá)水平發(fā)生改變。

讀到這里，是不是覺(jué)得對(duì)于活體轉(zhuǎn)染又有了更進(jìn)一步的了解呢，那就期待下一期內(nèi)容吧！

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