已有的研究發(fā)現(xiàn)微生物-腸-腦軸在帕金森?。≒D）中發(fā)揮重要作用，且REM睡眠行為障礙患者（RBD）是帕金森?。≒D）的特異性前驅(qū)標(biāo)志物之一。

2023年5月2日，香港中文大學(xué)醫(yī)學(xué)院榮潤(rùn)國(guó)團(tuán)隊(duì)在Nature Communications?發(fā)表題為“Gut?microbiome dysbiosis across early Parkinson’s disease, REM sleep behavior disorder and their first-degree relatives”的研究論文，其橫斷面隊(duì)列研究結(jié)果表明，與對(duì)照組和RBD患者的直系親屬（RBD-FDR相比，早期PD和RBD的腸道微生物群組成顯著改變。在控制了抗抑郁藥、滲透性瀉藥和排便頻率等潛在混雜因素后，RBD和RBD-FDR中已經(jīng)出現(xiàn)了丁酸鹽產(chǎn)生細(xì)菌的消耗和促炎柯林氏菌的富集。隨機(jī)森林模型確定了12種能有效區(qū)分RBD和對(duì)照組的微生物標(biāo)記物。這些發(fā)現(xiàn)表明，在年輕的RBD-FDR受試者中，當(dāng)RBD發(fā)生并開(kāi)始出現(xiàn)時(shí)，RBD樣腸道生態(tài)失調(diào)發(fā)生在PD的前驅(qū)期。

試驗(yàn)分組及樣本收集處理

本研究根據(jù)α-突觸核蛋白病的分期模型招募受試者，該模型恰當(dāng)?shù)卮砹伺两鹕〉牟±矸制凇?個(gè)不同的臨床階段分別為對(duì)照組(Braak患者0-1期）、RBD-FDR患者（0-2期）、RBD患者（2-3期）和早期PD患者（3-4期）。早期PD是指臨床確診為PD，運(yùn)動(dòng)癥狀發(fā)病時(shí)間小于5年的患者。

收集患者糞便，保存在無(wú)菌容器中，4小時(shí)內(nèi)使用專用試劑盒轉(zhuǎn)移到實(shí)驗(yàn)室。使用DNeasy PowerSoil Pro DNA Kit (Cat. No.: 47014, Qiagen)提取糞便樣本中DNA，構(gòu)建16S文庫(kù)，在illumina測(cè)序儀上進(jìn)行測(cè)序，然后按屬、科、門(mén)的層次來(lái)分解分類學(xué)表，并使用合并后的豐度表進(jìn)行下游分析。

腸道微生物推薦解決方案（上）

腸道微生物組是以糞便為代表的腸道樣本中微生物群體為研究對(duì)象，以功能基因篩選和測(cè)序分析為研究手段，對(duì)微生物多樣性、種群結(jié)構(gòu)、進(jìn)化關(guān)系、基因功能等及其與環(huán)境之間的相互關(guān)系進(jìn)行研究。從分子層面角度可主要分為以 DNA 為研究對(duì)象的宏基因組、以RNA為對(duì)象的宏轉(zhuǎn)錄組和以總核酸為研究對(duì)象的平行多組學(xué)研究。

一、樣本保存

該研究中糞便樣本由志愿者當(dāng)天采集，且4h內(nèi)運(yùn)送至實(shí)驗(yàn)室。這個(gè)要求對(duì)大量糞便樣本的收集帶來(lái)了挑戰(zhàn)，但糞便樣本中較多的雜質(zhì)存在，若不及時(shí)保存處理，會(huì)導(dǎo)致其中的微生物缺失，影響結(jié)果。

QIAGEN 最新開(kāi)發(fā)的PowerProtect DNA/RNA 是專為糞便樣本設(shè)計(jì)的 DNA和RNA保存液，通過(guò)滲透細(xì)胞來(lái)終止生物活性以便在保存和運(yùn)輸過(guò)程中維持微生物群落和功能特征的完整性，下游提取兼容 Power Pro系列試劑盒。

使用PowerProtect DNA/RNA，您可以在4°C至25°C甚至35°C的溫度下短時(shí)間穩(wěn)定糞便中的核酸，從而簡(jiǎn)化對(duì)后勤物流扥要求。

二、微生物核酸純化

以糞便為代表的腸道樣本中的微生物來(lái)源復(fù)雜且常含有未消化的食物、膽酸鹽、亞鐵血紅素、脂類和尿酸等抑制劑。如何選擇真正有效的裂解方法，高效去除抑制劑是微生物核酸純化的兩大關(guān)鍵要素。QIAGEN 在核酸純化領(lǐng)域精耕細(xì)作多年，憑借優(yōu)化的珠磨研磨方案、升級(jí)的抑制因子去除技術(shù) (inhibitor Removal Technology，IRT)、獨(dú)特的硅膠膜純化技術(shù)、優(yōu)化的裂解緩沖液體系以及一系列高效的手工和自動(dòng)化純化方案，確保從腸道樣本中純化得到高品質(zhì)核酸。

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