背景介紹

基因過表達(gene overexpression)是將目的基因編碼區(qū)序列(CDS)克隆到相應的質?；虿《据d體上，利用載體骨架上構建的調控元件，使基因可以在人為的控制條件下實現(xiàn)大量轉錄和翻譯，從而實現(xiàn)目的基因的過表達。此外，還可以選擇報告基因進行示蹤或抗性基因進行篩選。

常用的基因表達載體有質粒載體和病毒載體，病毒載體又包括：腺相關病毒載體、慢病毒載體、腺病毒載體和逆轉錄病毒載體等，廣泛應用于體外和體內(nèi)基因功能研究。

上篇為大家介紹了質粒載體、慢病毒載體、腺相關病毒載體三類基因過表達工具，詳情可點擊基因過表達工具介紹(上)查看，今天繼續(xù)為大家介紹其他三種工具，一起往下看吧~

【吉滿生物】基因過表達工具介紹（下）

04?PiggyBac轉座載體

PiggyBac屬于II類轉座子，通過“剪切-粘貼”機制移動，即從基因組一個位置轉座到另一個位置，不留下序列本身(與I類啟動子通過“復制-粘貼”的移動方式不同)，是目前轉基因研究中應用最廣泛的工具之一。

PiggyBac轉座子可利用質粒轉染(非病毒轉導)把感興趣的基因長期穩(wěn)定地整合到靶細胞基因組。具有安全、高效、負載容量大的優(yōu)點，且相對于一般載體，其插入位點為TTAA，因此具有比較高的特異性。piggyBac轉座系統(tǒng)不僅可作為哺乳動物及培養(yǎng)細胞的轉基因工具，也是一種潛在的非病毒類基因治療載體。

PiggyBac系統(tǒng)包含兩個載體：一個載體被稱為輔助質粒，負責編碼轉座酶；另一個載體被稱為轉座子質粒，包含兩個末端重復序列(TRs)以及兩者之間的被轉座區(qū)域。

載體特點

①安全性高、操作方便(可直接用質粒轉染細胞）

②體載容量大(10kb-20kb)，可實現(xiàn)多基因的共表達

③轉基因可長期穩(wěn)定地表達，通過調節(jié)轉座子質粒和輔助質粒的比例，提高外源基因的整合效率

④易于確定整合位點，通過反向PCR精確確定目的基因插入的位置

⑤不同類型細胞轉染效率差異較大

吉滿服務

吉滿生物的PiggyBac轉座子載體與輔助質粒經(jīng)過優(yōu)化后，可在大腸桿菌中高拷貝復制。該載體系統(tǒng)對多種類型的靶細胞均具有高效的轉導效率，實現(xiàn)外源基因的高水平表達。

05?Tet-On誘導表達慢病毒載體

Tet-On誘導表達系統(tǒng)是調控目的基因定時表達的強大工具，Tet-On誘導表達載體在沒有四環(huán)素或其他類似物(doxycycline)存在時，目的基因幾乎不表達；當添加四環(huán)素/Dox時，目的基因得以快速高水平表達。Tet-on表達調控系統(tǒng)是當前應用更為廣泛的四環(huán)素調控系統(tǒng)！

載體特點

①精準調控：Tet-On表達載體可嚴格調控基因的表達，藥物劑量及用藥時間可控，在沒有誘導劑的情況下可將背景泄露最小化，并保持該系統(tǒng)對四環(huán)素誘導的高靈敏度；

②表達量高：TRE啟動子可驅動GOI在誘導狀態(tài)下高水平表達；

③安全性好：四環(huán)素及其衍生物應用多年，安全可靠；低劑量即可獲得良好的效果。

吉滿服務

吉滿生物能為客戶提供Tet-on表達調控載體，并能根據(jù)客戶需要包裝成Tet-On慢病毒。

06?CRISPRa（轉錄激活）

CRISPR-Cas9系統(tǒng)是目前被廣泛運用的基因編輯系統(tǒng)，其原理是由sgRNA介導Cas9核酸酶靶向目標序列，對序列進行切割。Cas9核酸酶剪切活性取決于兩個結構域：RuvC和HNH。當這兩個結構域同時處于失活狀態(tài)時，Cas9將不具有核酸酶活性，成為dCas9(dead Cas9)。

CRISPRa(基因激活)系統(tǒng)是用于激活內(nèi)源性基因轉錄的強大工具，切割失活的dCas9連上轉錄激活因子(如VP64、p65和HSF1)，可以有效促進基因組特定位點的轉錄。研究表明，三種基于CRISPR-dCas9的轉錄激活系統(tǒng)(VPR, SAM和SunTag)在動物細胞中也能提高目的基因表達，并且效果更好，應用更廣泛。

載體特點

①操作簡易：僅需dCas9核酸酶、sgRNA和轉錄激活因子(如VP64)，即可調控目的基因的轉錄水平；

②調控可逆：與常規(guī)轉基因技術相比，不需導入外源DNA，不會永久性的修飾基因組DNA；

③強烈激活：轉錄激活的基因通常得到非常高水平的表達；

④適用廣譜：無物種限制、無細胞種類限制。

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吉滿生物科技（上海）有限公司成立于2011年，是專業(yè)從事生物科技前沿技術研發(fā)的高新技術企業(yè)。以病毒包裝為基礎，密切關注行業(yè)最前沿的科研進展，十二年深耕細作，創(chuàng)建了具有自主知識產(chǎn)權的分子生物學、細胞生物學、慢病毒、腺相關病毒、報告基因、抗體表達六大技術平臺。

2020年成立了專業(yè)細胞系子品牌DDXCELL，提供報告基因檢測、病毒包裝、工程細胞株構建，基因編輯及藥物篩選評價等技術服務及相關產(chǎn)品。

2022年載體品牌“載體通·Genovector”煥新升級，同時推出全新試劑品牌“優(yōu)試劑·Genoagent”，貫穿科研始末。

吉滿可為客戶提供幾千種的現(xiàn)貨載體和一站式定制服務。