一、理論考試部分

1.醋酸纖維薄膜電泳時(shí)，點(diǎn)樣的一端應(yīng)靠近電極的哪一端？為什么？

答：負(fù)極。因?yàn)檠逯懈鞣N蛋白質(zhì)在PH為8.6的環(huán)境中均帶負(fù)電，根據(jù)同性相吸，異性相斥原理，點(diǎn)樣端在負(fù)極時(shí)蛋白質(zhì)向正極泳動(dòng)從而實(shí)現(xiàn)蛋白質(zhì)分離。

2.用分光光度計(jì)測(cè)定物質(zhì)含量時(shí)，設(shè)置空白對(duì)照管的意義是什么？

? ?答：空白對(duì)照是為了排除溶劑對(duì)吸光度的影響。溶液的吸光度表示物質(zhì)對(duì)光的吸收程度，但是作為溶劑也能吸收，反射和透射一部分的光，因此必須以相同的溶劑設(shè)置對(duì)照，排除溶劑對(duì)吸光度的影響。

3.簡(jiǎn)述血清蛋白的醋酸纖維薄膜電泳的原理？

? ?答：血清蛋白中各種蛋白質(zhì)離子在電場(chǎng)力的作用下向著與自身電荷相反的方向涌動(dòng)，而各種蛋白質(zhì)等電點(diǎn)不同，且在PH為8.6時(shí)所帶電荷不同，分子大小不等，形狀各有差異，所以在同一電泳下永動(dòng)速度不同從而實(shí)現(xiàn)分離。

4.何謂Rf值？影響Rf值的主要因素是什么？

? ?答：Rf是原點(diǎn)到層析中心的距離與原點(diǎn)到溶劑前沿的距離之比。Rf的大小與物質(zhì)的結(jié)構(gòu)，性質(zhì)，溶劑系統(tǒng)，層析濾紙的質(zhì)量和層析溫度有關(guān)，

5.什么是鹽析？鹽析會(huì)引起蛋白質(zhì)變性嗎？一般我們用什么試劑做鹽析的實(shí)驗(yàn)？

答：鹽析是指當(dāng)溶液中的中性鹽持續(xù)增加時(shí)，蛋白質(zhì)的溶解度下降，當(dāng)中性鹽的濃度達(dá)到一定程度的時(shí)候，蛋白質(zhì)從溶液中析出的現(xiàn)象。鹽析不會(huì)引起蛋白質(zhì)的變性。一般用飽和硫酸銨溶液進(jìn)行鹽析。

6.簡(jiǎn)述DNS法測(cè)定還原糖濃度的實(shí)驗(yàn)原理？

? 答：還原糖與DNS在堿性條件下加熱被氧化成糖酸，而DNS被還原為棕紅色的3-氨基-5-硝基水楊酸。在一定范圍內(nèi)還原糖的量與3-氨基-5硝基水楊酸顏色的深淺成正比，用分光光度計(jì) 測(cè)出溶液的吸光度，通過(guò)查對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線可計(jì)算出3-氨基-5硝基水楊酸的濃度，從而得出還原糖的濃度。

7.依據(jù)我們所做的實(shí)驗(yàn)，說(shuō)明影響蛋白質(zhì)沉淀的因素是什么？影響蛋白質(zhì)變性的因素是什么？沉淀和變性有何聯(lián)系？

? ?答：水溶液中的蛋白質(zhì)分子由于表面形成水化層和雙電層從而形成穩(wěn)定的親水膠體顆粒，在一定的理化因素影響下蛋白質(zhì)顆粒因失去電荷和脫水而沉淀。? ? ? ? 這些因素包括溶液的酸堿度、鹽溶液的濃度、溫度、重金屬離子以及有機(jī)溶劑等。? ? ?變性蛋白質(zhì)不一定沉淀，沉淀的蛋白質(zhì)不一定變性。

8. 什么是碘值？脂肪的不飽和程度越大，碘值越大嗎？在測(cè)定碘值的實(shí)驗(yàn)中，氯仿的作用是什么？

答：每100g脂肪所吸收的碘的克數(shù)，即脂肪的碘值。脂肪的不飽和度越大，碘值就越大。氯仿作為溶劑，去溶解脂肪。

9.簡(jiǎn)述薄層層析法分離糖類(lèi)的原理？

答:薄層層析的實(shí)質(zhì)就是吸附層析，也就是在鋪有吸附劑的薄層上，經(jīng)過(guò)反復(fù)地被吸附劑吸附以及被擴(kuò)展劑擴(kuò)展的過(guò)程。而吸附劑對(duì)不同的物質(zhì)的吸附力不同，從而使糖在薄層上的泳動(dòng)速度不同達(dá)到分離的目的。

10.等電點(diǎn)的定義？蛋白質(zhì)在等電點(diǎn)時(shí)有哪些特點(diǎn)？

答：當(dāng)溶液的PH為一定數(shù)值時(shí)，其中的蛋白質(zhì)正負(fù)電荷相等，即凈電荷為零，此時(shí)的PH值就是該蛋白質(zhì)等電點(diǎn)。蛋白質(zhì)在等電點(diǎn)時(shí)的溶解度最小。

11.在蛋白質(zhì)顯色實(shí)驗(yàn)的黃色反應(yīng)中，反應(yīng)原理是什么？實(shí)驗(yàn)結(jié)果為什么會(huì)出現(xiàn)深淺不一的黃色？

答：含有苯環(huán)的氨基酸如酪氨酸和色氨酸，能被硝酸硝化成黃色的物質(zhì)，而且不同蛋白質(zhì)中所含的苯環(huán)數(shù)量不同，造成與試劑反應(yīng)的程度不同，因此呈現(xiàn)顏色深淺不一 。

12.RNA水解后的三大組分是什么？怎樣各自驗(yàn)證的？

答：核糖，磷酸，嘌呤堿。? ? 核糖+苔黒酚—Fe（濃HCI）綠色物質(zhì)；? ? ? ? 磷酸+鉬酸銨——藍(lán)色；? ? ? 嘌呤堿+硝酸銀——白色。

13.在等電點(diǎn)時(shí)，蛋白質(zhì)的溶解度為什么最低？

答：在等電點(diǎn)時(shí)，蛋白質(zhì)在溶液中凈電荷為零。蛋白質(zhì)分子失去了電荷的排斥作用，因分子運(yùn)動(dòng)聚集而沉淀下來(lái)。

14.雞蛋清可用作鉛中毒或汞中毒的解毒劑，為什么？

答：因?yàn)榈鞍踪|(zhì)可與重金屬離子汞、鉛等結(jié)合成不溶于水的復(fù)合物。則雞蛋清可以代替機(jī)體組織與重金屬反應(yīng)，從而減少汞、鉛對(duì)機(jī)體的損害。

15.離心管如何在天平上平衡？操作離心機(jī)時(shí)應(yīng)注意什么？

答：把放在小燒杯中的離心管（包括蓋子）和管套放在平衡的天平上，用膠頭滴管取離心液調(diào)平。? ? ? ? ? ?注意點(diǎn)：配平，等重的試管放在對(duì)稱(chēng)的位置；啟動(dòng)時(shí)要先蓋好蓋子，停止后才能開(kāi)蓋；有不正常的聲音時(shí)應(yīng)按STOP鍵。

16.血清醋酸纖維薄膜電泳可將人血清蛋白依次分為哪幾條區(qū)帶?哪條帶泳動(dòng)最快？影響蛋白質(zhì)泳動(dòng)速度的因素有哪些？

? ? 答：從正到負(fù)看：血清清蛋白、a1-球蛋白、a2-球蛋白、β-球蛋白、r-球蛋白；其中血清清蛋白點(diǎn)最快。影響因素：蛋白質(zhì)所帶電荷數(shù)，分子大小與形狀以及緩沖液濃度。

17.什么是抑制劑？什么是變性劑？抑制劑和變性劑的區(qū)別是什么？

? ? 答：凡是能使酶活性降低而不使酶失活變性的物質(zhì)成為抑制劑；凡是能引起蛋白質(zhì)變性失活的物質(zhì)叫變性劑。? ? ? ?抑制劑只是抑制蛋白質(zhì)的特性而變性劑則破環(huán)蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)。

18. 簡(jiǎn)述桔皮中提取果膠的原理？

答：原果膠是果膠在植物中的主要形式，而其不溶于水。故利用酸將原果膠水解為水溶性果膠并濃縮，然后利用果膠不溶于乙醇的特點(diǎn)，使其沉淀出來(lái)。

19. 什么是還原糖？所有單糖都是還原糖嗎？為什么？

答：指含有自由醛基或酮基，能使某些物質(zhì)還原的糖。所有的單糖都是還原糖。因?yàn)閱翁嵌己凶杂傻娜┗蛲⒕哂羞€原性。

難題

1.設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)區(qū)分蛋白質(zhì)、核酸。（雙縮脲試劑，二苯胺或苔黑酚）

2.設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)區(qū)分DNA、RNA。（二苯胺，苔黑酚）

3.在我們所做的實(shí)驗(yàn)中用乙醇可以沉淀哪些物質(zhì)，為什么？（糖，蛋白質(zhì)，DNA。水化層）

4.有5種已知的糖樣品，分別為葡萄糖、果糖、麥芽糖、半乳糖、棉子糖，現(xiàn)要測(cè)定一未知單糖為這五種糖中的哪一種，該如何測(cè)定，設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)。（糖薄層層析法）

5.現(xiàn)有一未知蛋白，如何確定其等電點(diǎn)？（見(jiàn)等電點(diǎn)沉淀）

6.從不同生物中提取出來(lái)的唾液淀粉酶，如何衡量其酶活力的高低?（等時(shí)間，不同量；等量，不同時(shí)間）

7.某蛋白質(zhì)中有三種蛋白組分，蛋白質(zhì)1的PI值為8.0，蛋白質(zhì)2的PI值為7.5，蛋白質(zhì)3的PI值為6.0，請(qǐng)選用合適的方法把這三種蛋白質(zhì)分離開(kāi)。（電泳）

8.大豆中富含蛋白質(zhì)，請(qǐng)至少列出兩種方法提取大豆蛋白。

? 答：鹽析法、有機(jī)溶劑，沉淀法，等電點(diǎn)沉淀法、吸附法、結(jié)晶法、電泳法、超離心法及柱層析法等。

9.某同學(xué)用了兩種不同的方法（方法A、方法B）提取大豆蛋白并進(jìn)行了純化，請(qǐng)你幫他鑒別是方法A提取出的大豆蛋白純度高，還是方法B提取出的大豆蛋白純度高。

10.在PH小于等電點(diǎn)的溶液中，蛋白質(zhì)帶什么電荷？為什么？（正電荷，……）

11. 什么是標(biāo)準(zhǔn)曲線法？舉例說(shuō)明在我們實(shí)驗(yàn)中的標(biāo)準(zhǔn)曲線是如何繪制的？（見(jiàn)DNS測(cè)定還原糖）