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基于ELVEFLOW微流控技術在病原微生物檢測中的研究進展

2023-09-18 14:41 作者:德國赫爾納  | 我要投稿

快速、準確地檢測病原微生物對于疫情防控和保障人民生命健康具有重大意義。近幾年,研究者們通過合理地設計微流控芯片,將Elveflow微流控技術與各種檢測技術相結合,已經開發(fā)出了多種用于病原微生物檢測的技術方法。相較于傳統(tǒng)的病原微生物檢測技術,Elveflow微流控檢測技術優(yōu)勢突出,具有操作人員技術要求不高、樣本需求量少和自動化程度高等優(yōu)點,適用于各種復雜環(huán)境下病原微生物的精準、快速檢測。本文對Elveflow微流控技術在病毒、細菌、真菌、衣原體及支原體等病原微生物的檢測應用進行了綜述,以期為病原微生物的檢測提供研究思路,促進微流控技術在病原微生物檢測中的發(fā)展,提高對疾病的預防和控制能力。

微流控(microfluidics)指的是使用微管道(尺寸為數(shù)十到數(shù)百微米)處理或操縱微小流體(體積為納升到阿升)的系統(tǒng)所涉及的科學和技術。Elveflow微流控系統(tǒng)通常包含閥門、微通道、反應室、壓力系統(tǒng)和檢測系統(tǒng),通過控制微流控裝置內流體的運動來實現(xiàn)樣品制備、反應、分離和檢測等功能。Elveflow微流控技術能夠控制微小流體,整合多種反應,其在病原微生物檢測中可以在微觀水平上精確控制樣品體積并減少體內和體外環(huán)境之間的差異,進而達到縮短反應時間和降低檢測成本的目的,具有快速、準確、樣品消耗少等優(yōu)點,為病原微生物的檢測提供了廣闊的前景。

基于Elveflow微流控技術的病毒檢測方法主要針對病毒細胞數(shù)量、表面特異性蛋白和特異性核酸片段來開展檢測。基于病毒細胞培養(yǎng)的空斑測定法是病毒鑒定和診斷的金標準,但存在通量低、所需樣品量大等問題,因此?Su 等設計了可以同時培養(yǎng)5種病毒的聚二甲硅氧烷芯片,該芯片系統(tǒng)不僅實現(xiàn)了病毒的高效鑒定,還完成了病毒的分離和抗病毒藥物的篩選,具有通量高和檢測樣本量少的優(yōu)點。

為了在Elveflow微流控檢測系統(tǒng)中實現(xiàn)對多靶標蛋白的靈敏識別,Guan 等設計了一個集成兩種單克隆抗體(mAb)的微流體系統(tǒng),用于腸道病毒71(EV71)的靈敏檢測。該系統(tǒng)將EV71 的主要衣殼蛋白VP1 的單克隆抗體1F4 和2H2 分別與羧基官能化磁珠和羧基官能化量子點偶聯(lián),最后通過熒光強度來直接評估靶標蛋白的濃度。該微流體系統(tǒng)在30 min 內對VP1 的檢測限(LOD)達到10pg/mL,與使用相同抗體的夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗的結果(310 pg/mL)相比,提升了31 倍。

細菌是許多疾病的病原體,可以通過皮膚、消化道、呼吸道、血液等方式傳播疾病,具有較強的傳染性??焖?、高靈敏、高特異性的病原菌現(xiàn)場檢測已成為迫切需要,現(xiàn)有的細菌檢測方法存在操作繁瑣、耗時長等問題,無法滿足即時檢測的需求;微流控芯片技術由于其小型化、便攜性好和低試劑消耗,為各分析物提供了一種方便、快捷的檢測工具。

為了進一步提高靈敏度,Kao 等研究了一種新型的微流控免洗熒光原位雜交(FISH[24])液滴檢測系統(tǒng)。其將樣品與試劑混合并裝入微流體盒中,通過離心使微流體乳化,將樣品制成微液滴用于細菌包封,使用鎖定核酸的LNA/DNA 分子信標和基于NaCl 尿素的雜交緩沖液,然后進行原位滲透、雜交和信號檢測。該檢測系統(tǒng)以大腸桿菌、肺炎克雷伯菌和奇異變形桿菌為對象進行驗證,檢測限為3×103 bacteria/mL,該系統(tǒng)達到單細胞靈敏度水平。


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