2019年11月，歐洲藥典 (Ph. Eur.) 委員會(huì)通過了13部新專論和4部新通則。新章節(jié)包括第2.6.32章，題為“使用重組因子C（2.6.32）檢測細(xì)菌內(nèi)毒素”。這將在未來幾周內(nèi)以歐洲藥典增刊10.3的形式發(fā)布，并可在歐洲藥品質(zhì)量局（EDQM）網(wǎng)站上查閱。該章節(jié)已于2021年1月1日生效。

2019年1月，歐洲藥典啟動(dòng)了準(zhǔn)備新通則的公眾咨詢，并且是第一部提及rFC測試的藥典，他們在第5.1.10章“細(xì)菌內(nèi)毒素測試使用指南”中提到了rFC測試。

“如一般通知所述，各論和總則中給出的測試方法已根據(jù)公認(rèn)的科學(xué)實(shí)踐和當(dāng)前的分析驗(yàn)證建議進(jìn)行了驗(yàn)證。總之，這個(gè)方法在通則的2.6.14章中被詳細(xì)描述，包括2.6.3章中的細(xì)菌內(nèi)毒素檢測方法以及2.6.32章中的單核細(xì)胞活化試驗(yàn)。因此，使用重組C因子測試細(xì)菌內(nèi)毒素本身不必重新驗(yàn)證，除非考慮它們在特定分析環(huán)境中被用于特定物質(zhì)或產(chǎn)品?！币虼耍试S將重組蛋白用作鱟變形細(xì)胞裂解物測定（LAL 測定）的替代方法。

rFC優(yōu)勢——LAL范式的改進(jìn)

rFC測試的優(yōu)勢圍繞著最新的范式變化；鑒于鱟種群的減少，維持和改進(jìn)現(xiàn)代測試方法的困難。

rFC測試被認(rèn)為具有LAL檢測的幾個(gè)優(yōu)勢，包括 (a) 可重復(fù)性/質(zhì)量，(b) 可持續(xù)性/可用性和 (c) 特異性。將簡要概述這些優(yōu)點(diǎn)。

可重復(fù)性/質(zhì)量

經(jīng)典的LAL檢測來自鱟，因此是不同批次之間自然變異的基礎(chǔ)。從標(biāo)準(zhǔn)曲線值和測試后得到的參數(shù)來看，生產(chǎn)批次之間的rFC可以保持其質(zhì)量屬性。rFC的生物技術(shù)生產(chǎn)允許用戶采購一致的產(chǎn)品，不受自然收獲蛋白質(zhì)變量的影響。這對于可重復(fù)和可靠的測試很重要。在集中收獲的動(dòng)物批次中出現(xiàn)的產(chǎn)品變異性包括年齡、性別、大小、環(huán)境等。全球公司更喜歡應(yīng)用于全球供應(yīng)鏈的一致性和標(biāo)準(zhǔn)化平臺(tái)。因此，重組生產(chǎn)的產(chǎn)品可以滿足這一標(biāo)準(zhǔn)。

可持續(xù)性/可用性

rFC是生物技術(shù)的產(chǎn)物；因此，與從承受生存壓力的海洋生物中收獲相反，它可以在細(xì)胞培養(yǎng)中“隨意”生產(chǎn)。在美國，鱟屬被列為“易危物種”，而在亞洲，鱟屬在世界自然保護(hù)聯(lián)盟紅色名錄中被列為“瀕危物種”。

迄今為止，LAL的全球可用性已在供應(yīng)鏈中得到滿足，該供應(yīng)鏈取決于地理位置隔離的生產(chǎn)和隨后從美國東海岸跨大西洋出口的LAL產(chǎn)品。在較小規(guī)模上，還使用了在亞洲當(dāng)?shù)厣a(chǎn)的鱟變形細(xì)胞裂解物 (TAL)。重組試劑的“隨意”生產(chǎn)有助于滿足全球供應(yīng)鏈的物流需求。

特異性

與?LAL 不同，rFC不含G因子，即β-葡聚糖酶原（β-葡聚糖的生物傳感器）。葡聚糖通常是纖維素過濾器在生產(chǎn)過程中的分解產(chǎn)物，也是自然水域(湖泊、河流和下水道)中普遍存在的污染物，是植物和真菌生長的副產(chǎn)品。β -葡聚糖激活LAL被稱為“假陽性”。即使用β-葡聚糖封閉緩沖液掩蔽，它也已被證明會(huì)影響LAL測定結(jié)果的變異性。rFC檢測沒有假陽性結(jié)果是另一個(gè)好處，它消除了LAL檢測的混雜因素。

近幾十年來，已經(jīng)發(fā)表了無數(shù)科學(xué)文章，展示了使用基于rFC的測定法對細(xì)菌內(nèi)毒素進(jìn)行可靠和可持續(xù)的檢測。相比之下，rFC和LAL方法的等效性能已得到了廣泛證明，不同的藥典開始將rFC納入其正式文本。

綜上所述，不同的監(jiān)管機(jī)構(gòu)已經(jīng)清楚地確定了從LAL轉(zhuǎn)向基于rfc的細(xì)菌內(nèi)毒素檢測的好處。歐洲藥典已于2020年7月發(fā)布新的總章，標(biāo)題為：使用重組因子C(2.6.32)進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素檢測。在美國，包括rFC和LAL兩種方法描述的USP <85>“細(xì)菌內(nèi)毒素檢查”修訂草案被納入。在亞太地區(qū)，日本和中國藥典已經(jīng)開始采用同樣的方法，在下一個(gè)版本中納入rFC。