微小病變型腎病動物模型【北京動物實驗代做】

【造模機(jī)制】多柔比星(阿霉素)、嘌呤霉素和柔紅霉素均可誘導(dǎo)建立微小病變型腎病,多柔比星系含醌的蒽環(huán)抗生素,由于在腎臟內(nèi)被代謝還原為半醌型自由基,后者與氧反應(yīng)產(chǎn)生活性氧,誘發(fā)腎小球上皮細(xì)胞脂質(zhì)過氧化反應(yīng);改變腎小球上皮細(xì)胞糖蛋白代謝,破壞腎小球濾過膜的結(jié)構(gòu)和功能,最終導(dǎo)致膜濾過屏障的選擇性變化而引起蛋白尿,誘發(fā)成典型的 MCN 模型。

【造模方法】

1.動物及分組免疫細(xì)胞選用健康封閉群雄性 SD 大鼠,體重為 170～200g,普通飼料適應(yīng)性飼養(yǎng)1 周后,尿蛋白測定均為陰性,隨機(jī)分組。

2.模型制備造模組每只大鼠分兩次經(jīng)尾靜脈注射多柔比星（意大利 Faimitalia 公司產(chǎn)品),第一次注射 4mg/kg,時隔 1 周,第二次注射 3.5mg/kg。正常對照組以同樣方法注射相應(yīng)量的生理鹽水。從第一次給藥起,于第 2 周、第 3 周、第 4 周、第 5 周末留取 24 小時尿,其間給予高蛋白飲食(軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院第四研究所配制,經(jīng)測定其蛋白含量為 38.9％,其中絡(luò)蛋白含量為 18.4%),第 5 周末處死動物,取血、肝臟標(biāo)本?；?、病理及基因轉(zhuǎn)錄水平進(jìn)行研究?？?RNA.ALB及PFactin mRNA定量分析,RNA 電泳,病理組織切片,電鏡觀察,并對其生3.指標(biāo)測定分別測定尿蛋白定量、血漿白蛋白、總蛋白、血清膽固醇、血肌酐、肝組軟

【模型特點】研究結(jié)果表明,兩次給藥法模型血漿蛋白降低,尿蛋白升高至(512+98.5)mg/24h,模型典型而穩(wěn)定,成活率明顯提高,達(dá) 90%。電鏡觀察結(jié)果符合微小病變型路新的病理變化。鼠肝白蛋白 inRNA 轉(zhuǎn)錄水平為對照組的 2.01 倍。提示該模型的改造是成功的.Bertani 等人采用尾靜脈一次性注射7.5mg/kg 多柔比星于 1982 年創(chuàng)立多柔比星急性腎病模型,病模尿蛋白量明顯增大,且一直保持高水平,但 1周后多數(shù)動物有嚴(yán)重腹瀉,甚至導(dǎo)致動物死亡,造模成功率低,且因腹瀉嚴(yán)重有礙于藥物特別是口服藥物的篩選及病理研究,改用兩次給藥法可克服以上不足。兩次給藥法模型具有以下優(yōu)點：1.顯著提高了造模成功率病模大鼠腹瀉率明顯降低(83.3%/10%),腹瀉程度亦輕,因此,模型死亡率下降,造模成功率顯著提高(30%/90％)。2.病變典型而穩(wěn)定給藥后第 2 周尿蛋白大于 100mg/24h,第 4 周尿蛋白顯著增加(>400mg/24h),第 5 周達(dá)到高峰(512.1±98.9)mg/24h,并有明顯的低蛋白血癥、高膽固醇血癥。尿蛋白持續(xù)時間長,動態(tài)觀察 4 個月均大于 300mg/24h。3.病理模型更接近臨床實際病理觀察符合微小病變型腎病的病理改變。本模型各項生化指標(biāo)與原模型相近,且模型大鼠普遍有明顯水腫,更接近臨床實際。4.優(yōu)于嘌呤霉素和免疫血清腎病模型經(jīng)從基因水平對多柔比星腎病模型大鼠研究，結(jié)果表明該模型肝臟白蛋白基因轉(zhuǎn)錄水平略高于報道的嘌呤霉素模型和免疫血清腎病模型。

【應(yīng)用范圍】為探索原發(fā)性腎病的發(fā)病機(jī)制及藥物防治的研究提供了良好的實驗基礎(chǔ)。在兒童腎病的研究中尤為重要。

【注意事項】

1.多柔比星給藥次數(shù)和劑量是決定造模成功的關(guān)鍵應(yīng)嚴(yán)格按兩次給藥法造模,第一次靜脈注射 4mg/kg,隔 1 周第二次注射 3.5mg/kg,動態(tài)觀察 5 周。

2.應(yīng)選擇較年輕、體重適中的大鼠造模最好選用體重為 170～200g SD 雄性大鼠造模,其反應(yīng)敏感,實驗效果好。有文獻(xiàn)報道,不同體重的大鼠在造模過程中尿蛋白出現(xiàn)的時間及尿蛋白量均有所不同。較大體重的大鼠尿蛋白出現(xiàn)的時間較早,尿蛋白的量也相對較多,但持續(xù)高尿蛋白時間不如年輕大鼠。

【模型評估】兩次注射多柔比星誘導(dǎo)所建立的大鼠腎病模型方便、可靠,多柔比星模型優(yōu)于其他藥物誘導(dǎo)模型,與人類 MCN 病變具有較好的相似性,為人類 MCN 的研究提供了良好的實驗基礎(chǔ)。但是藥物誘導(dǎo)的模型在發(fā)病機(jī)制、臨床表現(xiàn)和對治療的反應(yīng)上均與人類MCN存在一些差異。人類的 MCN 多對激素治療有較高的敏感性,尤其在兒童,但有研究顯示多柔比星腎病大鼠應(yīng)用激素治療后蛋白尿并無改善。

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