為了找到合適的條件，PolyMag CRISPR須以1μL/μg DNA的比例進(jìn)行測(cè)試。為了DNA數(shù)量，建議96-well,每well?0.0625/0125/0.25μg，24-well每孔0.25/0.5/1μg以及在6孔中每孔1/2/4μg。

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這些條件可能需要根據(jù)你的細(xì)胞、DNA、RNA等進(jìn)行進(jìn)一步的優(yōu)化。

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艾美捷OZ Biosciences?PolyMag CRISPR試劑盒優(yōu)化協(xié)議：

建議您優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件，以充分利用磁轉(zhuǎn)染?. 可以優(yōu)化幾個(gè)參數(shù)：

?使用的核酸劑量

?PolyMag CRISPR與核酸的比例

?細(xì)胞密度

?培養(yǎng)時(shí)間

1.首先優(yōu)化PolyMag CRISPR/DNA的比例。為此，使用固定數(shù)量的DNA。變化PolyMag CRISPR的量為0.25至5m升/mg的DNA。PolyMag CRISPR/DNA的比例可以通過(guò)將所使用的試劑的體積加倍或相乘來(lái)改變。試劑可以是在去離子水中預(yù)先稀釋。

2.此后，以固定比例的PolyMag CRISPR/DNA改變核酸劑量之前進(jìn)行了優(yōu)化。為此，您可以對(duì)預(yù)成型的磁矢量復(fù)合體。

3.也可以研究每個(gè)質(zhì)粒的化學(xué)計(jì)量：改變每個(gè)質(zhì)粒的比例整個(gè)混合物中的DNA。

4.在確定了正確數(shù)量的PolyMag CRISPR和核酸后，您可以通過(guò)優(yōu)化復(fù)合體的細(xì)胞數(shù)量和孵育時(shí)間來(lái)實(shí)現(xiàn)這一過(guò)程形成和用于磁場(chǎng)應(yīng)用。