蛋白印跡（Western Blot，WB）也稱免疫印跡，是一種基于抗體的蛋白質(zhì)分析技術(shù)。利用抗體-抗原的特異性相互作用可以在復(fù)雜的蛋白質(zhì)混合物中識別感興趣蛋白（目標(biāo)蛋白質(zhì)），以實(shí)現(xiàn)感興趣蛋白的定性和半定量分析，在蛋白質(zhì)表達(dá)水平、抗體活性、蛋白質(zhì)相互作用以及蛋白質(zhì)翻譯后修飾分析中廣泛應(yīng)用。

WB主要包括以下步驟：

（1）樣品分離：利用SDS-PAGE分離蛋白混合物；

（2）轉(zhuǎn)膜：將蛋白條帶從凝膠轉(zhuǎn)移到固相載體——例如硝酸纖維素薄膜（NC）上。固相載體可以吸附蛋白質(zhì)，并保持電泳分離的蛋白質(zhì)生物學(xué)活性不變。轉(zhuǎn)移后的NC膜就稱為一個(gè)印跡（blot）；

（3）標(biāo)記鑒定：用目標(biāo)蛋白的抗體（一抗）處理NC膜——只有待研究的蛋白質(zhì)才能與一抗特異結(jié)合形成抗原抗體復(fù)合物，這樣清洗除去未結(jié)合的一抗后，只有在目標(biāo)蛋白的位置上結(jié)合著一抗。用一抗處理過的NC膜再用二抗處理，二抗是指一抗的抗體。通常，第二抗體帶有特殊標(biāo)記，當(dāng)與合適的底物結(jié)合時(shí)，會產(chǎn)生可檢測的熒光信號，信號強(qiáng)度與膜上的目標(biāo)蛋白的豐度相關(guān)。

通過以上步驟，可以捕獲與一抗相互結(jié)合的感興趣蛋白，用于判斷感興趣蛋白的存在與否以及一抗與感興趣蛋白的相互作用分析；此外，還可根據(jù)熒光信號強(qiáng)度對目標(biāo)蛋白進(jìn)行半定量鑒定，用于蛋白質(zhì)白表達(dá)水平分析。

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