(一)生產(chǎn)、純化原理:青霉素生產(chǎn)最初使用特異青霉(eieilim notatum),后改用產(chǎn)量更高的產(chǎn)黃青霉(P chrnsogemum)。乳糖可收緩慢利用而維持青霉素生產(chǎn)的有利條件，玉米漿含多種氨基酸和苯乙胺，可為青毒素合成提供前體。青霉素為弱酸性pKa=2.75,在pH=2時(shí)呈游離酸狀態(tài)。易溶于醇、酮、醚、陷類，水溶性較差。pH=7左右，青霉素可與堿金屬或堿土金屬成鹽，水溶性顯著提高。青霉素金屬鹽易溶于水和甲醇、幾乎不溶于乙隨、氯仿、醋酸戊酯等。

(二)滴定原理:青霉素在堿性環(huán)境下時(shí)，B-內(nèi)酰胺環(huán)水解生成青霉噻唑酸，1 分子青霉噻唑酸和4分子碘起反應(yīng)。而青霉素不吸收碘，硫代硫酸鈉(或其他鹽)可以消耗刺余的碘，滴定則可以計(jì)算耗碘量?？瞻讓?shí)驗(yàn)可以用于排除體系中可能存在的其他耗碘物質(zhì)。

(三)試劑:

1. 1 mol/L鹽酸，1 mol/L NaOH.

2.0.5%淀粉指示劑。

3. 0.01 molL (實(shí)際濃度需要標(biāo)定) Na2S2O3.

4. 0.01molLb2:取13g碘單質(zhì)溶于36%KI定容至100 mL.加3滴鹽酸。使用時(shí)稀釋100倍即為0.01mol/L碘

5. pH4.5酣酸緩沖液: 25.8g醋酸鉀， 加入19.6mL醋酸，定容至2000 mL.

6. 2%碳酸鈉溶液

7. 20%乙酸鉀-乙醇溶液:乙酸鉀加入到無(wú)水乙醇中

8.無(wú)水硫酸鈉

9.乙酸丁酯

10. pH試紙

11.青霉發(fā)酵液

(四)實(shí)驗(yàn)步驟:

產(chǎn)黃青霉發(fā)酵:

1.配置馬鈴薯培養(yǎng)基，取馬鈴薯去皮切塊，稱取200 g煮沸20min后，加水定容至1000 mL.稱取20g乳糖/燕糖加入培養(yǎng)基:

2.分裝培養(yǎng)基并滅菌，121 攝氏度?20 min:

3.稱取卡那霉素，配置成50 mg/mL的母液，? 0.22 um濾膜過(guò)濾除菌，分裝:

5.接種產(chǎn)黃青霉南孢子，28心180 rpm培養(yǎng)7d.

青霉素提取純化及檢測(cè):

1.產(chǎn)黃青霉發(fā)酵培養(yǎng)7d;

2.使用紗布過(guò)濾菌絲球，收集濾液，測(cè)定上清液總體積:

3.使用鹽酸調(diào)節(jié)pH值至2左右(盡快)，估測(cè)濾液體積，

4.加入約1/3體積的乙酸丁酯，震蕩10 min后靜置5min分層，有機(jī)相(上層)備用:

5.下層水相繼續(xù)加入初始總體積1/3的乙酸丁酯，重復(fù)上一步，棄去水相:

6.混合兩次溶劑，讀取體積，加入其1/3體積的2%碳酸鈉溶液，農(nóng)蕩10 min后靜置5 min分層，水相(下層)備用:

7.重復(fù)上一步，棄有機(jī)相:，

8. 混合兩次水溶液，重復(fù)第4-5步，收集并混合有機(jī)相(此時(shí)體積約為發(fā)酵體積的827);

9.在乙酸丁酯中加入少量無(wú)水硫酸鈉，過(guò)濾:

10.將液體加入到燒杯中，加入約120體積乙酸鉀-乙醇溶液，1s C攪拌10 min (或置于冰箱內(nèi)，每隔幾分鐘攪拌一次)。 小心倒掉上清液，濕品體真空干燥:

11.稱取適當(dāng)樣品加水溶解(參考濃度約1 mg/mL,最少8 mL):

12. 滴定:取2mL樣品，加0.4 mL Imol/L NaOH,室溫靜置20 min;

依次加入0.4 mL 1 mo/L鹽酸、2 mL pH4.5乙酸緩沖液、8 mL 0.01 mol/L碘溶液，混勻后暗處?kù)o置20 min:

加1 mL淀粉指示劑，0.01 mol/LNa2S2O3;滴定(溶液由藍(lán)色變?yōu)榻K點(diǎn)為無(wú)色)，記錄消耗體積v13.空白滴定:取2mL樣品，不加酸堿，依次加入2mL pH4.5乙酸緩沖液、8 mL0.01 mo/L碘溶液，混勻后暗處?kù)o置20min:.

加1 mL淀粉指示劑，0.01 molLNa2S2O3;滴定(溶液由藍(lán)色變?yōu)榻K點(diǎn)為無(wú)色)，記錄消耗體積V

4.依照公式計(jì)算青霉素濃度和純度

(五)實(shí)驗(yàn)結(jié)果:

(六)實(shí)驗(yàn)討論

青霉素產(chǎn)物的純度和什么有關(guān)?