培養(yǎng)工藝添加物蛋氨酸亞砜亞胺MSX雜質(zhì)含量檢測
蛋氨酸磺酸鹽為蛋氨酸的磺酸鹽,又名L-蛋氨酸亞砜亞胺(l-methionine sulfoximine,以下簡稱為MSX),具有氨基酸的基本結(jié)構(gòu),外觀為白色結(jié)晶粉末,是一種有效的谷氨酰胺合成酶(GS)活性抑制劑,該試劑可廣泛作為倉鼠卵巢(CHO)細(xì)胞和其他哺乳動物細(xì)胞系中GS穩(wěn)轉(zhuǎn)系統(tǒng)質(zhì)粒的整合的一種篩選劑。
含外源GS基因的細(xì)胞在MSX作用下可以在缺乏谷氨酰胺的培養(yǎng)基中生長,而MSX對內(nèi)源性GS基因則產(chǎn)生抑制作用而導(dǎo)致細(xì)胞死亡。隨著MSX選擇壓力的不斷加大與多次篩選,可獲得高表達(dá)的穩(wěn)定細(xì)胞株。按照《通則9102藥品雜質(zhì)分析指導(dǎo)原則》的要求,MSX屬于工藝相關(guān)雜質(zhì),相關(guān)的化學(xué)、物理和毒性性質(zhì)尚未經(jīng)完整的研究,其在重組蛋白質(zhì)產(chǎn)品中的雜質(zhì)殘留可能對用藥安全性有著影響。
因此作為培養(yǎng)工藝中的添加物,MSX殘留相關(guān)的雜質(zhì)是需要重點關(guān)注的。MSX在紫外沒有吸收峰,也缺乏相應(yīng)的顯色方法,實驗室查閱文獻(xiàn)資料發(fā)現(xiàn)目前常見的MSX檢測方法為HPLC色譜分析,分享檢測過程方法如下:通過將衍生化標(biāo)準(zhǔn)品和衍生化待測樣品進(jìn)行液相色譜檢測,色譜條件流動相a相為0.1mol/l乙酸鈉水溶液;流動相b相為100%乙腈;色譜柱溫度為35℃。
對檢測結(jié)果進(jìn)行分析,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算待測樣品溶液中MSX的濃度。該檢測方法中衍生過程無需復(fù)雜衍生試劑的配制或萃取,在范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系,重復(fù)性好準(zhǔn)確性高,具有良好的兼容性和靈敏度,反應(yīng)時間短檢測速度快,可用于微量樣品的檢測。也可以利用UPLC超高效液相色譜檢測,通過增加了分析的通量、靈敏度及色譜峰容量從而實現(xiàn)更快速的檢測。
色譜作為穩(wěn)定的技術(shù)手段,廣泛應(yīng)用于制藥行業(yè)的研發(fā)與質(zhì)控。微源檢測實驗室擁有HPLC、UPLC、LC-MS等檢測儀器,可高效、精準(zhǔn)的檢測L-蛋氨酸磺酸鹽及其他氨基酸代謝物含量變化,實驗室擁有百余臺檢測設(shè)備儀器可根據(jù)樣品情況提供定制化檢測方法,滿足生物醫(yī)藥、精細(xì)化工創(chuàng)新等企業(yè)的不同檢測需求,如果您有這方面的檢測需求歡迎評論區(qū)留言或致電實驗室!