今天讀的是孔老師關(guān)于ADAMTS-7的第二篇文章。

昨天那篇講的是ADAMTS-7介導(dǎo)損傷動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞遷移和新生內(nèi)膜形成，具體是ADAMTS-7降解COMP，使平滑肌容易遷移。

今天這篇是ADAMTS-7的另外一個(gè)作用，抑制損傷動(dòng)脈再內(nèi)皮化并通過切割血栓反應(yīng)蛋白-1促進(jìn)血管重塑。

看不懂誒，介導(dǎo)新生內(nèi)膜形成/抑制再內(nèi)皮化不矛盾嗎？

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再內(nèi)皮化的概念：等于快速內(nèi)皮修飾，大概是快速的修復(fù)對(duì)血管是有利的，可以減少斑塊形成。

再狹窄的發(fā)生可能是因?yàn)樗幬锵疵撝Ъ懿粌H抑制平滑肌遷移，還抑制了再內(nèi)皮化。因此需要一種策略，不僅抑制平滑肌遷移還促進(jìn)再內(nèi)皮化。

這篇研究主要的工作是發(fā)現(xiàn)ADAMTS-7不僅激活VSMC，還通過一種不依賴于COMP的機(jī)制抑制損傷后內(nèi)皮細(xì)胞的恢復(fù)。

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Result1：Adamts7?- / -小鼠是可存活的，不顯示任何明顯的表型

Result2：Adamts7?- / -小鼠的大規(guī)模表型分析

好怪，建立動(dòng)物模型也可以作為兩個(gè)結(jié)果

利用β-半乳糖苷酶的WB和染色證明ADAMTS-7的成功敲除。這些全敲除小鼠是可育的，生命參數(shù)、超聲心動(dòng)圖、組織病理學(xué)、肺功能均正常。

Result3：ADAMTS-7缺乏促進(jìn)頸動(dòng)脈再內(nèi)皮化并改善新內(nèi)膜形成

用鋼絲損傷頸動(dòng)脈，通過埃文斯藍(lán)染色來量化再內(nèi)皮化?？梢钥吹紸DAMTS-7缺陷小鼠再內(nèi)皮化程度更高，并且新內(nèi)膜面積更小。

Result4：ADAMTS-7在體內(nèi)和體外抑制EC增殖

用溴脫氧尿苷法反應(yīng)內(nèi)皮增殖情況，ADAMTS-7缺陷小鼠損傷后三天的增殖情況明顯更好。

過表達(dá)ADAMTS-7可以抑制細(xì)胞增殖

而ADAMTS-7的中和抗體能夠劑量依賴性地逆轉(zhuǎn)ADAMTS-7對(duì)EC增殖的抑制作用。

Result5：ADAMTS-7抑制EC遷移

細(xì)胞遷移是再內(nèi)皮化的重要步驟，于是接下來評(píng)估了過表達(dá)ADAMTS-7后細(xì)胞的遷移能力。過表達(dá)后遷移能力降低。下面左圖是體外劃痕實(shí)驗(yàn)，右圖是改良的Boyden室測定。

而ADAMTS-7中和抗體顯著消除ADAMTS-7的抗遷移作用。

Result6：COMP不影響EC的增殖/遷移

對(duì)HUVEC細(xì)胞，補(bǔ)充COMP之后增殖/遷移能力不變。COMP敲除小鼠與WT小鼠動(dòng)脈損傷后再內(nèi)皮化程度無顯著差異。因此，ADAMTS-7可能通過COMP不依賴的機(jī)制抑制EC恢復(fù)。

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Result7：用分泌組分析鑒定一種新的ADAMTS-7底物

在VSMC中腺病毒過表達(dá)ADAMTS-7，收集上清液分析蛋白組學(xué)。

血小板反應(yīng)蛋白-1（TSP-1）是第一個(gè)被發(fā)現(xiàn)的內(nèi)源性抗血管生成蛋白，能夠抑制EC的增殖和遷移。過表達(dá)ADAMTS-7之后，上清中TSP-1減少，而ADAMTS-7敲除小鼠中TSP-1增多。這表明ADAMTS-7確實(shí)影響了TSP-1水平。

Result8：ADAMTS-7與TSP-1相關(guān)

接下來驗(yàn)證了ADAMTS-7與TSP-1的相互作用。co-IP證實(shí)二者可以互相結(jié)合

在HUVEC和COS-7中進(jìn)一步證實(shí)。

在Eahy926細(xì)胞中轉(zhuǎn)染TSP-1全長和ADAMTS-7的不同缺失突變體，進(jìn)行雜交實(shí)驗(yàn)，找到了結(jié)合位點(diǎn)是在C端。

這一部分證明了無論是在體內(nèi)還是體外，ADAMTS-7均能與TSP-1結(jié)合。

Result9：ADAMTS-7體外降解TSP-1

過表達(dá)ADAMTS-7，在全細(xì)胞裂解液中，全長TSP-1減少。

上清中TSP-1也減少。特殊的是在上清中觀察到了140kDa片段，這在細(xì)胞裂解液中沒有。

保持TSP-1，增加ADAMTS-7，全長TSP-1減少，而140kDa的TSP-1增多。

保持ADAMTS-7，增加TSP-1，碎片增加。

用ADAMTS-7抗體處理，TSP-1碎片消失。右邊的是ADAMTS-7催化結(jié)構(gòu)域的特異抗體。

Result10：ADAMTS-7通過TSP-1抑制再內(nèi)皮化

SiRNA敲低TSP-1，細(xì)胞計(jì)數(shù)和細(xì)胞周期分析表明，ADAMTS-7對(duì)細(xì)胞增殖的抑制作用被緩解。

對(duì)遷移作用的抑制被緩解

對(duì)再內(nèi)皮化的阻滯作用被緩解。

Discussion

1.?ADAMTS-7敲除小鼠的脂質(zhì)代謝變化

2.?TSP-1不參與ADAMTS-7介導(dǎo)的VSMC遷移

3.?ADAMTS-7可能優(yōu)先靶向EC TSP-1。然而，我們不能排除ADAMTS-7在ec和vsmc中降解TSP-1的可能性

4.?需要進(jìn)一步研究ADAMTS-7對(duì)TSP-1的裂解位點(diǎn)，以及裂解片段對(duì)EC功能和血管修復(fù)的生物學(xué)功能。

5.?與ECM中TSP-1的低水平相比，上清中TSP-1或片段的量越大，可能對(duì)EC細(xì)胞起更重要的作用。

這篇文章想說明的問題：一方面，ADAMTS-7通過COMP的降解促進(jìn)VSMC遷移。另一方面，ADAMTS-7對(duì)TSP-1的降解導(dǎo)致產(chǎn)生具有生物活性的TSP-1片段，這些片段可能介導(dǎo)延遲的再內(nèi)皮化并促進(jìn)新內(nèi)膜的形成。

這說明TSP-1具有雙重作用，是很好的治療靶點(diǎn)，因此在2023年孔老師組又發(fā)了一篇關(guān)于ADAMTS-7的動(dòng)脈粥樣硬化疫苗。明天再看qwq