細胞復(fù)蘇

①清洗水浴鍋，更換水浴鍋中的水，打開水浴鍋開關(guān)，并將水溫調(diào)至37℃。

②穿戴手套和眼鏡，做好防護措施，用長鑷將細胞凍存管從液氮罐中取出，用干凈塑料手套覆蓋雙手，必要時可以在凍存管口纏上封口膠，放入37℃水浴鍋中快速融化，為防止水浴鍋中水進入細胞凍存管中，可將細胞凍存管放入PE手套中進行快速融化，保持管帽高于水浴鍋液面，同時輕輕搖晃細胞凍存管加快融化。

③待細胞凍存液完全融化后，用酒精紗布擦拭凍存管外部，避免污染。在超凈工作臺中取10 ml離心管，加入3?ml不完全培養(yǎng)基，將細胞凍存懸液迅速轉(zhuǎn)移至離心管中，輕柔吹打懸液，室溫800?rpm/min 離心5 min，棄去含二甲基亞砜（DMSO）的上清液。

④向離心管內(nèi)加入3?ml?含10% FBS的完全培養(yǎng)基，輕柔吹打，使完全培養(yǎng)基和離心管底部的細胞沉淀充分混勻，重懸至細胞均勻分布且為單個細胞。將細胞懸液接種到細胞瓶，記錄接種時間、細胞名稱、細胞代數(shù)、細胞瓶編號、實驗人員姓名等基本信息，放入恒溫細胞培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。24小時后在顯微鏡下觀察細胞有無污染，是否貼壁，并更換培養(yǎng)基。

以上操作步驟僅供參考，本人保留一切權(quán)利。