您：小刀，我之前有聽過你的siRNA文庫講座，還挺感興趣的

您：但是我們實驗室沒有高通量儀器，也可以做siRNA文庫篩選嗎？會不會太麻煩？

我：不會很麻煩，小幾十個基因的篩選排槍就能搞定，高通量儀器一般適用于幾百、幾千或幾萬個基因的篩選

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您：之前沒做過siRNA篩選，我有點怕我操作不好

我：這個不用太擔心，基本的轉(zhuǎn)染操作和單基因一致，只不過通常是用96孔細胞板進行，所以需要多些細心和耐心

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您：好的，那我可以試試看

您：對了，你講座中提到的成品文庫，我看了下，這些基因家族分類和我想要研究的方向不能夠完美匹配呢

我：你說的是這些亞庫嘛？

我：這個問題不大，圖中所有文庫的基因列表我都有，你可以看看你的研究方向和哪套庫靠的上，然后挑選自己喜歡的基因進行定制。又或者你自己有想要研究的一些基因，可以直接發(fā)我，畢竟只要有5個基因就能定制文庫了，價格還劃算

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您：能定制還蠻不錯的，那我來看看能不能湊些基因出來給你

您：但是定制的規(guī)格、產(chǎn)品形式又是什么樣的？是不是和成品不一樣??？

我：基本是一樣的，但是定制更靈活：規(guī)格上有0.1, 0.25, 0.5, 1, 2 nmol?5種可選，siRNA你可以選擇4條分裝的，也可以選擇SMARTpool形式的

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您：等等等，什么叫4條分裝，SMARTpool又是什么？

我：哈哈，講座沒認真聽吧，是這樣的，每個基因我們會提供4條不同的siRNA，4條分裝就是每條siRNA單獨放1個孔里，那SMARTpool就是把4條siRNA預混后共同放在1個孔里

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您：那我要怎么選??？哪種更合適呢？

我：做多個基因篩選的話，我是更建議選SMARTpool的，這樣你的轉(zhuǎn)染工作量就減少了3/4，而且SMARTpool沉默效果更好，畢竟4條不同的siRNA共同發(fā)揮作用，大哥不行還有二哥、三哥和四哥呢（奸笑的表情包）

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您：那沉默效率怎樣？有沒有做過驗證?。咳f一效果不好怎么辦？

我：這個可以放心，所有的siRNA出廠前都有做過驗證，而且是有沉默效率保障的，保證每個基因?qū)?條siRNA中至少有3條在mRNA水平上有≥75%的沉默效率，如果效果不好，提供陰陽性對照、siRNA的qPCR數(shù)據(jù)，廠家是會賠付的

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您：OKK，那這個規(guī)格我咋選呢，我是想買個0.1nmol的，但是具體能做幾次篩選我有點慌？

我：和我想到一起去了，如果只是利用文庫做一下基因的初篩，那0.1nmol絕對夠用了

我：關于能做幾次篩選，這個取決于你最終轉(zhuǎn)染時siRNA的使用終濃度了。以96孔板篩選，25nM終濃度，每個基因3個復孔為例，大概可以支持個10次篩選左右

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您：這樣啊，那0.1nmol確實夠用了，篩到以后，我再單獨購買大規(guī)格的siRNA就是了，沒必要篩選的時候就買那么多，不劃算

我：對的，就是這個意思

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您：行，那我了解了，我現(xiàn)在就去找找基因去，你把泛素化集合相關的基因列表發(fā)我，我看看選一些，再把我手頭上有的基因列一列，到時發(fā)你

我：好噠，這是基因列表，請查收

參考軟文：（在公眾號“優(yōu)寧維分子生物”中進行查看）

1.?siRNA篩選小文庫，確定不來一套試試？

2.?高效基因篩選工具——去泛素化酶siRNA文庫的應用

3. siRNA——你不知道的那些小奧秘

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