? ? ?冷痛（Cold pain）是神經(jīng)痛中的常見癥狀，然而國內(nèi)外聚焦冷痛的研究卻剛剛起步，冷痛機(jī)理遠(yuǎn)不明晰。本課題組在前一自然基金研究中意外發(fā)現(xiàn)白細(xì)胞介素（IL）-33/ST2通路與冷痛感知和神經(jīng)病理性冷痛高度相關(guān)；進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)提示其可能與冷受體TRPM8有關(guān)。在此基礎(chǔ)上，本項(xiàng)目將：1）利用轉(zhuǎn)基因動(dòng)物結(jié)合病毒載體工具，特異性調(diào)控背根神經(jīng)節(jié)（DRG）中衛(wèi)星細(xì)胞IL-33和神經(jīng)元ST2，明確細(xì)胞特異性IL-33/ST2通路在冷痛中的關(guān)鍵作用；2）利用行為學(xué)、分子生物學(xué)、電生理、鈣成像等技術(shù)，明確TRPM8在IL-33介導(dǎo)冷痛及DRG神經(jīng)元興奮中的作用;3)闡明IL-33作用于ST2后通過募集接頭分子TIRAP，結(jié)合PIP2，進(jìn)而激活/增敏TRPM8導(dǎo)致冷痛的機(jī)制。該研究將闡明IL-33/ST2通路對冷受體TRPM8的調(diào)控機(jī)制及其在冷痛中的關(guān)鍵作用，有助于揭示冷痛機(jī)理，為冷痛特異性治療提供新靶點(diǎn)。

? ??冷痛（Cold pain）是神經(jīng)痛中的常見癥狀，但是冷痛的病理生理機(jī)制遠(yuǎn)不明晰。本課題在前期研究基礎(chǔ)上進(jìn)一步明確背根神經(jīng)節(jié)（DRG）中白細(xì)胞介素（IL）-33/ST2通路在神經(jīng)病理性冷痛中的作用及TRPM8的調(diào)控作用。具體研究結(jié)果如下：1）采用行為學(xué)技術(shù)，明確ST2基因敲除對坐骨神經(jīng)分支性損傷（SNI）和奧沙利鉑誘發(fā)神經(jīng)病理性冷痛行為的緩解作用，以及外周IL-33導(dǎo)致神經(jīng)病理性冷痛的作用。2）構(gòu)建條件性基因敲除小鼠，明確DRG傷害性神經(jīng)元ST2基因敲除對小鼠神經(jīng)病理性冷痛行為的緩解作用。3）采用免疫熒光結(jié)合共聚焦技術(shù)，明確DRG中IL-33在小鼠衛(wèi)星細(xì)胞的定位，并結(jié)合RNA scope技術(shù)從mRNA和蛋白兩個(gè)水平明確ST2在小鼠DRG神經(jīng)元的表達(dá)和定位；采用免疫組化技術(shù)明確ST2在人DRG神經(jīng)元中的表達(dá)和定位。4）采用qPCR和WB技術(shù)發(fā)現(xiàn)，神經(jīng)痛小鼠DRG中IL-33、ST2和TRPM8的表達(dá)顯著增加。5）采用電生理技術(shù)，發(fā)現(xiàn)ST2基因敲除顯著抑制神經(jīng)痛誘發(fā)的DRG神經(jīng)元興奮性增加。6）采用行為學(xué)技術(shù)，發(fā)現(xiàn)TRPM8阻斷劑或者殺死TRPM8神經(jīng)元顯著抑制IL-33誘發(fā)冷痛行為的影響，而且小劑量TRPM8激動(dòng)劑顯著加劇IL-33的致痛作用。7) 采用鈣成像技術(shù)研究發(fā)現(xiàn)，TRPM8通道特異性阻斷劑或殺死TRPM8神經(jīng)元顯著抑制IL-33誘發(fā)DRG神經(jīng)元鈣內(nèi)流。8) 神經(jīng)痛小鼠DRG中ST2與TRPM8存在共定位。9）ST2基因敲除顯著抑制神經(jīng)痛誘發(fā)的TRPM8表達(dá)上調(diào)。10）運(yùn)用CO-IP方法，發(fā)現(xiàn)神經(jīng)痛小鼠DRG中ST2和TRPM8存在相互作用。該研究闡明了IL-33/ST2通路對冷受體TRPM8的調(diào)控機(jī)制及其在冷痛中的關(guān)鍵作用，有助于揭示冷痛機(jī)理，為冷痛特異性治療提供新靶點(diǎn)。

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