Cell Counting Kit-8 (CCK-8) 細(xì)胞增殖與活性檢測試劑盒是百螢生物生產(chǎn)的一種基于 SST-8 的廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的快速高靈敏度檢測試劑盒。其主要成分為水溶性四唑鹽 SST-8 (2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽)。WST-8在電子耦合載體1-Methoxy PMS存在的情況下，可以被線粒體內(nèi)的脫氫酶還原生成高度水溶性的橙黃色甲臜產(chǎn)物（formazan），顏色的深淺與細(xì)胞的增殖成正比，與細(xì)胞毒性成反比。使用酶標(biāo)儀在450nm波長處測定OD值，間接反映活細(xì)胞數(shù)量。

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1.CCK-8試劑盒和MTT試劑盒有什么區(qū)別？

答：CCK-8試劑盒和MTT試劑盒都是用于測量細(xì)胞活力的方法，但CCK-8試劑盒有以下優(yōu)勢：

（1）CCK-8試劑盒使用的WST-8比MTT更易被細(xì)胞還原，因此靈敏度更高，檢測時(shí)間更短；

（2）CCK-8試劑盒生成的甲臜產(chǎn)物是水溶性的，不需要添加有機(jī)溶劑或者洗滌細(xì)胞，操作更簡單方便；

（3）CCK-8試劑盒對細(xì)胞毒性更小，不會(huì)影響細(xì)胞的正常生長和功能。

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2.CCK-8的工作原理是什么？

答：CCK-8試劑盒中的WST-8可以被活細(xì)胞中的代謝產(chǎn)物還原為可溶性的形式。還原后的WST-8在存在電子耦合劑的條件下形成一種有色產(chǎn)物，其吸光度與細(xì)胞數(shù)量和代謝活性相關(guān)。通過測量吸光度的變化，可以間接評估細(xì)胞的增殖能力或毒性。

3.?CCK的保存和穩(wěn)定性如何？

答：CCK穩(wěn)定性高，避光條件-20℃有效期2年，4℃有效期1年。經(jīng)常使用建議4℃保存，避免反復(fù)凍融。CCK正常顏色為粉紅色，若顏色發(fā)生明顯偏差，質(zhì)量可能有發(fā)生變化。

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4.CCK的細(xì)胞毒性如何？

答：CCK毒性非常低，因此CCK檢測完后相同的細(xì)胞還能用于其它細(xì)胞增殖檢測如結(jié)晶紫染色法，中性紅染色法或DNA熒光染色法。

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5.CCK會(huì)對活細(xì)胞進(jìn)行染色嗎？

答：不會(huì)，首先WST-8不會(huì)進(jìn)入細(xì)胞染色，整個(gè)顯色反應(yīng)都是在培養(yǎng)體系中進(jìn)行的。另外WST和WST-8甲臜都屬于高度水溶性組分，反應(yīng)結(jié)束更換新的培養(yǎng)液，即可外源組分。

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6.做細(xì)胞活性檢測時(shí)，每孔應(yīng)該接種多少個(gè)細(xì)胞？

答：當(dāng)使用標(biāo)準(zhǔn)96孔板時(shí)，貼壁細(xì)胞的小接種量至少為1,000個(gè)/孔(100 μL培養(yǎng)基)。檢測白細(xì)胞時(shí)的靈敏度相對較低，因此推薦接種量不低于2,500個(gè)/孔(100 μL培養(yǎng)基)。

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7.若是使用6孔或者24孔板進(jìn)行試驗(yàn)，CCK試劑使用量怎么樣呢？

答：如果要使用6孔板或24孔板實(shí)驗(yàn)，請先計(jì)算每孔相應(yīng)的接種量，并按照每孔培養(yǎng)基總體積的10%加入CCK溶液。

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8.能否用384孔板進(jìn)行細(xì)胞增殖與活性檢測的實(shí)驗(yàn)?zāi)兀?/strong>

答：可以，CCK-8產(chǎn)品的使用量為每孔培養(yǎng)基總體積的10%。建議先將CCK-8產(chǎn)品稀釋一倍，然后加入培養(yǎng)基總體積的20%即可，這樣可減少誤差。

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9.培養(yǎng)基的本底顏色如酚紅會(huì)不會(huì)影響細(xì)胞活性的檢測呢？

答：不會(huì)的，培養(yǎng)基中酚紅的吸光度可以在計(jì)算時(shí)，通過扣除空白孔中本底的吸光值而消去，因此不會(huì)對檢測造成影響。

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10.在加入CCK-8時(shí)可否不更換培養(yǎng)基？

答：一般情況下可以不更換培養(yǎng)基。但是如果培養(yǎng)基里有氧化還原性物質(zhì)的話，有可能會(huì)產(chǎn)生誤差，必須更換其它培養(yǎng)基。

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11.只可以在450?nm波長處測OD值嗎？

答：可以在450?nm波長處測OD值，但是若無此波長的濾光片，可選擇吸光度在430-490 nm之間的濾光片，但是450 nm濾光片的檢測靈敏度高。

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12.若是暫不檢測OD值，該如何處理？

答：若暫時(shí)不測定OD值，可以向每孔中加入10 μL 0.1 M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。24小時(shí)內(nèi)測定，吸光度不會(huì)發(fā)生變化

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13.在實(shí)驗(yàn)中OD值太高，怎么解決？

答：可以縮短加入CCK-8后的培養(yǎng)時(shí)間。例如：可以把加入CCK-8試劑后的培養(yǎng)時(shí)間由2小時(shí)縮短為1小時(shí)。此外，可適當(dāng)減少細(xì)胞的數(shù)量。

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14.如果OD值太低，怎么解決？

答：可以采取2個(gè)辦法：1、適當(dāng)增加細(xì)胞數(shù)量??2、延長加入CCK-8試劑后的反應(yīng)時(shí)間。

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15.應(yīng)該每次做標(biāo)準(zhǔn)曲線嗎？

答：建議每次做。雖然細(xì)胞是一樣的，但是細(xì)胞的狀態(tài)不一定一樣。對于狀態(tài)不一樣的細(xì)胞，建議每次做標(biāo)準(zhǔn)曲線。

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16.在cck-8顯色過程中，如何終止反應(yīng)

答:有以下幾種方法（96孔板）：

(1)?在顯色反應(yīng)后，將培養(yǎng)板放置4°冰箱內(nèi)；

(2)?每孔加入10ul 0.1M HCL溶液。

(3)?每孔加入10ul 1%（w/v）的SDS溶液。注：反應(yīng)停止后，應(yīng)在24h內(nèi)測定

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17.如何減少由于CCK-8試劑在孔壁上的殘留所帶來的誤差

答：可以在加樣前用培養(yǎng)基稀釋CCK-8試劑并混勻后加樣

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18.好用的 CCK-8 試劑盒推薦？

答：百螢生物生產(chǎn)的?Cell Counting Kit-8（CCK-8）細(xì)胞活力檢測試劑盒已廣泛用于生物活性因子的活性檢測，抗腫瘤藥物的篩選，細(xì)胞增殖的測定，細(xì)胞毒性檢測以及藥敏等與細(xì)胞活性和增殖相關(guān)的實(shí)驗(yàn)

19.如何使用CCK-8進(jìn)行細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)？

答：通常，使用CCK-8進(jìn)行細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)的步驟如下：

（1）將需要測定增殖能力的細(xì)胞均勻懸浮在培養(yǎng)基中，并將其分配到孔板或培養(yǎng)皿中。

（2）在每個(gè)孔中加入CCK-8試劑，并確保試劑均勻分布。

（3）將孔板或培養(yǎng)皿放回培養(yǎng)箱中，進(jìn)行一定時(shí)間的培養(yǎng)，使細(xì)胞與試劑發(fā)生反應(yīng)。

（4）反應(yīng)結(jié)束后，使用吸光度計(jì)測量吸光度，并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線或控制組進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，得出細(xì)胞增殖能力的相對值。

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20.CCK-8試劑盒的優(yōu)點(diǎn)是什么？

答：（1）高靈敏度：CCK-8試劑可以對低細(xì)胞數(shù)進(jìn)行檢測，因此對于罕見細(xì)胞或稀釋的細(xì)胞樣品非常有用。

（2）快速操作：CCK-8試劑盒提供了一種快速而簡便的方法來評估細(xì)胞的增殖情況，通常只需幾個(gè)小時(shí)即可得到結(jié)果。

（3）可行性高：CCK-8試劑盒對各種細(xì)胞類型都具有較好的適用性，可應(yīng)用于多種細(xì)胞培養(yǎng)條件和實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)。

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21.有沒有CCK-8及與其他細(xì)胞增殖檢測試劑的特性對比？

答：圖中提供了多種用于檢測細(xì)胞增殖的方法、對比，供參考

22.CCK-8試劑盒是否有副作用？

答：CCK-8試劑盒是一種常用的細(xì)胞增殖檢測試劑，通常在細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中使用，并且已被廣泛驗(yàn)證和接受。一般情況下，正確使用CCK-8試劑盒不會(huì)對細(xì)胞產(chǎn)生明顯的副作用。CCK-8試劑本身對細(xì)胞具有較低的毒性。它是一種水溶性試劑，主要由WST-8（水溶性四氧化三氮唑鹽）和電子媒介體1-Methoxy PMS（促進(jìn)電子傳遞）組成。

在CCK-8試劑中，WST-8可被細(xì)胞內(nèi)的代謝活性還原為橙色的水溶性產(chǎn)物，該產(chǎn)物在細(xì)胞外可通過光學(xué)密度測量進(jìn)行定量檢測。1-Methoxy PMS作為電子媒介體，促進(jìn)WST-8的還原反應(yīng)。

當(dāng)CCK-8試劑與細(xì)胞接觸時(shí)，其影響對細(xì)胞的影響主要來自WST-8的還原產(chǎn)物。在適當(dāng)?shù)臐舛认?，CCK-8試劑對細(xì)胞的生長和代謝活性影響較小，并不會(huì)對細(xì)胞造成明顯的毒性。

然而，值得注意的是，對于特定的細(xì)胞類型或?qū)嶒?yàn)條件，可能需要根據(jù)實(shí)際情況進(jìn)行優(yōu)化和驗(yàn)證。此外，在使用CCK-8試劑時(shí)，建議遵循相關(guān)的操作規(guī)程和安全指南，確保安全操作和正確解讀實(shí)驗(yàn)結(jié)果。