蛋白質(zhì)是生命活動(dòng)的主要承擔(dān)者，也是生物系統(tǒng)中大部分生物活性成分，在藥物靶標(biāo)的呈現(xiàn)方式中占有舉足輕重的地位。近年來，基于質(zhì)譜的蛋白組學(xué)在農(nóng)業(yè)、醫(yī)藥領(lǐng)域發(fā)展迅速，尤其是在小分子/藥物蛋白靶點(diǎn)的發(fā)現(xiàn)中應(yīng)用廣泛。根據(jù)蛋白的不同特性和活性，衍生出較多的發(fā)現(xiàn)靶標(biāo)的技術(shù)手段。

上篇小編已經(jīng)整理出依據(jù)蛋白的熱穩(wěn)定性（TPP）發(fā)現(xiàn)蛋白類靶點(diǎn)（點(diǎn)擊查看TPP技術(shù)詳解），本期小編將介紹一種基于蛋白親和性發(fā)現(xiàn)靶點(diǎn)的技術(shù)——限制性酶解-質(zhì)譜分析(Limited proteolysis mass spectrometry, LiP-MS)，與化合物結(jié)合后的蛋白受到“保護(hù)”形成差異，通過檢測這些差異尋找靶點(diǎn)。

LIP-MS原理

基于質(zhì)譜技術(shù)對(duì)小分子-蛋白結(jié)合進(jìn)行檢測的技術(shù)。在生理?xiàng)l件下，蛋白處于動(dòng)態(tài)平衡狀態(tài)，會(huì)有各種合適的空間構(gòu)象。當(dāng)特定配體（如藥物、小分子）等與特定蛋白結(jié)合時(shí)，會(huì)通過改變（增加）靶蛋白結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性，使蛋白抵抗水解。那相對(duì)于原蛋白由于位阻變化，不會(huì)暴露出廣譜性蛋白酶酶切位點(diǎn)。

運(yùn)用廣譜性蛋白酶（常用的為蛋白酶K）對(duì)樣本進(jìn)行一次酶切，再將蛋白樣品變性，用胰酶進(jìn)行二次酶切。通過質(zhì)譜檢測，比較不同處理?xiàng)l件的樣品中全酶切及半酶切肽段的信號(hào)強(qiáng)度變化，進(jìn)而分析蛋白構(gòu)象變化。

LIP-MS項(xiàng)目流程

LIP-MS推薦實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

LIP-MS應(yīng)用領(lǐng)域

1. 分析翻譯后修飾引起的蛋白構(gòu)象變化

2. 分析蛋白酶活性的變化（構(gòu)象變化會(huì)導(dǎo)致酶活性的改變）

3. 分析蛋白-蛋白相互作用及網(wǎng)絡(luò)

4. 分析蛋白-（代謝、藥物）小分子的相互作用及網(wǎng)絡(luò)

5. 疾病生物標(biāo)志物發(fā)現(xiàn)（例如神經(jīng)退行性疾病，淀粉樣蛋白/可溶性蛋白的比例）

技術(shù)特點(diǎn)與優(yōu)勢

1. 不需要進(jìn)行化學(xué)修飾；

2. 允許識(shí)別和檢測蛋白質(zhì)-小分子相互作用，包括變構(gòu)、酶-底物、酶-產(chǎn)物和藥物-靶標(biāo)相互作用；

3. 可以探測原位結(jié)構(gòu)變化；

4. 識(shí)別分辨率幾乎為12個(gè)氨基酸的細(xì)微結(jié)構(gòu)圖譜，檢測小分子結(jié)合位點(diǎn)；

5. 可以鑒定生物活性小分子與其靶蛋白之間的主要結(jié)合基序；

6. 擁有行業(yè)領(lǐng)先水平分辨率的4D-質(zhì)譜儀timsTOF HT，保障檢測結(jié)果。

可接受樣本類型及送樣標(biāo)準(zhǔn)

LIP-MS高分文獻(xiàn)

以上，Lip-MS就先介紹到這里，現(xiàn)在，您對(duì)該技術(shù)掌握了多少呢？青蓮可以幫您設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)指定個(gè)性化方案哈。

小編也整理了近些年的高分文獻(xiàn)，希望能給您提供一些思路~