產(chǎn)品名稱：甘油菌(蛋白誘導(dǎo)表達菌株)

產(chǎn)品編號：D0337BL21(DE3)

產(chǎn)品包裝：200μl

BL21(DE3)甘油菌，是收集生長在對數(shù)期的BL21(DE3)菌，加入含有甘油的細菌凍存液制備而成?？梢灾苯觿澠桨寤蛐×?、大量培養(yǎng)。本菌株適用于T7啟動子(T7 promoter)調(diào)控目的基因表達的pET系列等原核表達質(zhì)粒。

BL21缺失細胞質(zhì)中的Lon蛋白酶(Lon protease)和胞外膜上的OmpT蛋白酶(OmpT protease)，能有效避免重組表達蛋白的降解，所以被廣泛用作外源蛋白的表達菌株。

使用方法：

1.劃平板接種：
取出BL21(DE3)甘油菌置于冰上，并置于超凈臺內(nèi)，后續(xù)操作都在超凈臺內(nèi)操作。
a.用鑷子和塑料槍頭操作：鑷子的頂端在70%酒精中蘸一下，并且在酒精燈上略略燒一下，使鑷子的頂端處于無菌狀態(tài)。用鑷子夾取一個無菌的200μl塑料槍頭，蘸取少量BL21(DE3)甘油菌，然后把蘸有菌液的塑料槍頭，以盡量和LB平板接近平行的角度，在不含抗生素的LB平板上連續(xù)作S形或Z形劃動，再用一無菌的200μl塑料槍頭，在原先的劃線上以90o或120o角，再在LB平板上連續(xù)作S形或Z形劃動。通常換槍頭重復(fù)操作2-3次即可。37℃倒置培養(yǎng)過夜。
b.用接種環(huán)操作：將接種環(huán)在酒精燈上略略燒一下，使接種環(huán)處于無菌狀態(tài)。微冷后，蘸取少量BL21(DE3)甘油菌，在不含抗生素的LB平板上連續(xù)作S形或Z形劃動。把接種環(huán)再燒一下，微冷后，在原先的劃線上以90o或120o角，再在LB平板上連續(xù)作S形或Z形劃動。通常用接種環(huán)重復(fù)操作2-3次即可。37℃倒置培養(yǎng)過夜。
2.直接培養(yǎng)：
BL21(DE3)甘油菌置于冰上，并置于超凈臺內(nèi)，后續(xù)操作都在超凈臺內(nèi)操作。把鑷子的頂端在70%酒精中蘸一下，并且在酒精燈上略略燒一下，使鑷子的頂端處于無菌狀態(tài)。用鑷子夾取一個無菌的塑料槍頭或牙簽，蘸取少量BL21(DE3)甘油菌，然后把蘸有菌液的塑料槍頭或牙簽放到裝有3ml LB的細菌培養(yǎng)試管內(nèi)或裝有100ml或更大體積LB的細菌培養(yǎng)瓶內(nèi)。37℃，約200rpm培養(yǎng)過夜。
3.感受態(tài)細菌的制備
可以使用一步法感受態(tài)細菌制備試劑盒(D0301)、超級感受態(tài)細菌制備試劑盒(D0302)或其它方法進行感受態(tài)細胞。

注意事項：

使用本甘油菌時可以不必完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂板或進行液體培養(yǎng)即可。也可以完全融解后使用，但隨著凍融次數(shù)的增加細菌的活力會逐漸下降。在沒有結(jié)凍的情況下，菌體會逐漸沉淀至管底，請務(wù)必注意適當(dāng)混勻后使用。

為保證菌種純正，避免其它細菌污染，盡量先劃平板然后再挑單克隆菌落進行后續(xù)操作。

本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。

為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

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