紙電泳和醋酸纖維薄膜電泳
紙電泳是用濾紙作支持介質(zhì)的一種早期電泳技術(shù)。盡管分辨率比凝膠介質(zhì)要差,但由于其操作簡(jiǎn)單,所以仍有很多應(yīng)用,特別是在血清樣品的臨床檢測(cè)和病毒分析等方面有重要用途。
紙電泳使用水平電泳槽。分離氨基酸和核苷酸時(shí)常用pH 2~3.5的酸性緩沖液,分離蛋白質(zhì)時(shí)常用堿性緩沖液。選用的濾紙必須厚度均勻,常用國(guó)產(chǎn)新華濾紙和進(jìn)口的Whatman l。點(diǎn)樣方法有干點(diǎn)法和濕點(diǎn)法。濕點(diǎn)法是在點(diǎn)樣前即將濾紙用緩沖液浸濕,樣品液要求較濃,不亦多次點(diǎn)樣。干點(diǎn)法是在點(diǎn)樣后再用緩沖液和噴霧器將濾紙噴濕,點(diǎn)樣時(shí)可用吹風(fēng)機(jī)吹干后多次點(diǎn)樣,因而可以用較稀的樣品。電泳時(shí)要選擇好正、負(fù)極,電壓通常使用2~10l~10g和5g~1001號(hào)濾紙。點(diǎn)樣位置是在濾紙的一端距紙邊5cm~10cm處。樣品可點(diǎn)成園形或長(zhǎng)條形,長(zhǎng)條形的分離效果較好。點(diǎn)樣量為5 V/cm的低壓電泳,電泳時(shí)間較長(zhǎng)。對(duì)于氨基酸和肽類等小分子物質(zhì),則要使用50~200 V/cm的高壓電泳,電泳時(shí)間可以大大縮短,但必須解決電泳時(shí)的冷卻問(wèn)題,并要注意安全。
電泳完畢記下濾紙的有效使用長(zhǎng)度,然后烘干,用顯色劑顯色,顯色劑和顯色方法,可查閱有關(guān)書藉。定量測(cè)定的方法有洗脫法和光密度法。洗脫法是將確定的樣品區(qū)帶剪下,用適當(dāng)?shù)南疵搫┫疵摵筮M(jìn)行比色或分光光度測(cè)定。光密度法是將染色后的干濾紙用光密度計(jì)直接定量測(cè)定各樣品電泳區(qū)帶的含量。
醋酸纖維薄膜電泳與紙電泳相似,只是換用了醋酸纖維薄膜作為支持介質(zhì)。將纖維素的羥基乙?;癁榇姿狨ィ苡诒笸坎汲捎芯患?xì)密微孔的薄膜,其厚度為0.1~0.15mm。
? 醋酸纖維薄膜電泳與紙電泳相比有以下優(yōu)點(diǎn):① 醋酸纖維薄膜對(duì)蛋白質(zhì)樣品吸附極少,無(wú)“拖尾”現(xiàn)象,染色后蛋白質(zhì)區(qū)帶更清晰。② 快速省時(shí)。由于醋酸纖維薄膜親水性比濾紙小,吸水少,電滲作用小,電泳時(shí)大部分電流由樣品傳導(dǎo),所以分離速度快,電泳時(shí)間短,完成全部電泳操作只需90 min左右。③ l 血清,點(diǎn)樣量甚至少到0.靈敏度高,樣品用量少。血清蛋白電泳僅需 2 g的蛋白樣品也可以得到清晰的電泳區(qū)帶。臨床醫(yī)學(xué)用于檢測(cè)微量異常蛋白的改變。④l,僅含51 應(yīng)用面廣??捎糜谀切┘堧娪静灰追蛛x的樣品,如胎兒甲種球蛋白、溶菌酶、胰島素、組蛋白等。⑤ 醋酸纖維薄膜電泳染色后,用乙酸、乙醇混合液浸泡后可制成透明的干板,有利于光密度計(jì)和分光光度計(jì)掃描定量及長(zhǎng)期保存。
由于醋酸纖維薄膜電泳操作簡(jiǎn)單、快速、價(jià)廉,目前已廣泛用于分析檢測(cè)血漿蛋白、脂蛋白、糖蛋白、胎兒甲種球蛋白、體液、脊髓液、脫氫酶、多肽、核酸及其他生物大分子,為心血管疾病、肝硬化及某些癌癥鑒別診斷提供了可靠的依據(jù),因而已成為醫(yī)學(xué)和臨床檢驗(yàn)的常規(guī)技術(shù)。