生物制藥工藝學(xué) 期末試卷（A 卷）

一、填空題（每空 0.5分，共 30 分）

1．酶轉(zhuǎn)化法與直接發(fā)酵法生產(chǎn)氨基酸的反應(yīng)本質(zhì)相同，均屬酶轉(zhuǎn)化反應(yīng)。但兩者相

比，酶轉(zhuǎn)化法所需設(shè)備及工藝簡(jiǎn)單，產(chǎn)物 濃度 高， 轉(zhuǎn)化率 高，生產(chǎn)周期 短 ，

副產(chǎn)物 少，酶的利用率也高。

2．多肽的化學(xué)合成有液相合成和固相合成，常用的氨基保護(hù)基有 芐氧羰基 、

叔丁氧羰基（BOC） 和 9-芴甲氧羰基(Fmoc) 。其中Fmoc 最常用。

3．到目前為止，多糖的構(gòu)效關(guān)系方面的研究還是很不完善的，但可以確定多糖的活

性與其 高級(jí)結(jié)構(gòu) 、 分支度及其側(cè)鏈 、 分子量 、及 多糖中的取代基 等密切

相關(guān)。

4、溶質(zhì)通過(guò)色譜柱時(shí)造成的峰加寬效應(yīng)包括分子擴(kuò)散 、渦流擴(kuò)散 、 流動(dòng)相中傳質(zhì)阻力 、 固定相中傳質(zhì)阻力。

5、寫(xiě)出下列離子交換劑類(lèi)型：732 強(qiáng)酸型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂 ，724 弱酸型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂 ，717 強(qiáng)堿型陰離子交換樹(shù)脂 ，CM-C 陽(yáng)離子交換纖維素 ,DEAE-C 陰離子交換纖維素 ，PBE94 陰離子交換劑 。

6、常用的吸附劑有 活性炭 ， 硅膠 和 大孔吸附樹(shù)脂 等。

7、過(guò)飽和溶液的形成方法有蒸發(fā)法、溫度誘導(dǎo)法、鹽析結(jié)晶法、有機(jī)溶劑結(jié)晶法、等電點(diǎn)法、微量擴(kuò)散法、化學(xué)反應(yīng)結(jié)晶、共沸蒸餾結(jié)晶（八選七）。

8、根據(jù)色譜機(jī)理，色譜柱分為：反相色譜、正相色譜、離子交換色譜、凝膠過(guò)濾色譜（或親和色譜） 。

10、透析的方法有：旋轉(zhuǎn)透析器，平面透析器， 連續(xù)透析器，淺流透析器。

11、常用的制備型離心機(jī)轉(zhuǎn)子有 角度 轉(zhuǎn)子， 水平 轉(zhuǎn)子， 區(qū)帶 轉(zhuǎn)

子， 垂直 轉(zhuǎn)子。

12、克服濃差極化現(xiàn)象的措施有 攪拌 ， 震動(dòng)， 錯(cuò)流， 切流。

13、供體 ， 受體 和 載體 是重組 DNA技術(shù)的三大基本元件

14、寫(xiě)出下列英文縮寫(xiě)的中文名稱(chēng)： IFN 干擾素 ；IL-2 白介素－2 ；

TNF 腫瘤壞死因子 。

15、青霉素屬于 β-內(nèi)酰胺 類(lèi)抗生素，它的性質(zhì)很不穩(wěn)定，用溶劑萃取法分離時(shí)整個(gè)提煉過(guò)程應(yīng)在 低溫 ， 快速 ， 準(zhǔn)確調(diào)節(jié)pH 值下 進(jìn)行。

16、四環(huán)類(lèi)抗生素是一類(lèi)以四并苯（萘并萘）為母核的一族抗生素；鏈霉素是

氨基糖苷 類(lèi)抗生素；紅霉素是分子內(nèi)含有 14 元環(huán)大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)抗生素。

二、名詞解釋?zhuān)啃☆}3 分，共24分）

1、 基因藥物： 核酸類(lèi)藥物，以遺傳物質(zhì) DNA、RNA 為治療物質(zhì)基礎(chǔ)的藥物（1 分），如核酸疫苗、反義藥物。（1 分）與基因工程類(lèi)藥物不同，基因工程藥物化學(xué)組成上主要是蛋白質(zhì)或多肽，但基因藥物組成上主要為核酸（1 分）。

2、

2、尼柯?tīng)査够匠淌剑?/p>

式中 m1、m2、C1、C2 分別為樹(shù)脂上和平衡溶液中 A1、A2 兩種離子的濃度。Z1、Z2

分別為兩種離子的價(jià)電數(shù)。K 值為“交換常數(shù)”。該方程式表達(dá)了離子交換平衡時(shí)，

兩種離子與交換劑吸附強(qiáng)弱的數(shù)量關(guān)系。當(dāng) K>1 時(shí)表示樹(shù)脂對(duì) A1離子的吸附力大于

A2 離子，反之亦然。（1分）

3、分級(jí)分離：將分子量相差不大的大分子物質(zhì)加以分離，如分離血清球蛋白與白蛋白（2.5 分），分級(jí)分離應(yīng)盡量使待分離各物質(zhì)的 K 值相差大些，并使分子量分布不在凝膠分離范圍的一側(cè)（0.5 分）。

4、干涉 RNA（RNAi）RNA interference：是指在生物體細(xì)胞內(nèi)，dsRNA（1 分）引起同源 mRNA 的特異性降解（1 分），因而抑制相應(yīng)基因表達(dá)的過(guò)程。是一種在生物體內(nèi)普遍存在的轉(zhuǎn)錄后水平的基因沉默，也是抵御外在感染的重要保護(hù)機(jī)制。（1 分）

5、速度區(qū)帶離心法： 又叫速率區(qū)帶離心法或分級(jí)區(qū)帶離心法。離心操作時(shí)將樣品液置于連接或不連接線性或非線性密度梯度液上（如蔗糖、甘油、KBr、CsCl 等）（1 分），控制離心時(shí)間，使具有不同沉降速度的粒子處于不同的密度梯度層內(nèi)分成一系列區(qū)帶，達(dá)到彼此分離的目的。（2 分）本法適用于分離顆粒大小不同而密度相近或相同的組分，如 DNA與 RNA 混合物，核蛋白體亞單位及線粒體、溶酶體及過(guò)氧化酶體等。

6、滲透壓沖擊法： 細(xì)胞破碎的一種方法（1分）。先把細(xì)胞放在高滲溶液中，由于滲透壓的作用，細(xì)胞內(nèi)的水分便向外滲出，細(xì)胞發(fā)生收縮，當(dāng)達(dá)到平衡后，將介質(zhì)快速稀釋或?qū)⒓?xì)胞轉(zhuǎn)入水或緩沖液中，由于滲透壓發(fā)生突然變化，胞外的水分迅速滲入胞內(nèi)，使細(xì)胞快速膨脹而破裂，使產(chǎn)物釋放到溶液中（2 分）。

7、氣泡壓力法： 是測(cè)定濾膜最大孔徑的簡(jiǎn)易方法（1分）。氣體排除微孔濾膜孔隙中的液體并在膜表面形成氣泡時(shí)，須克服液體的表面張力，孔徑與氣體壓力有一定的關(guān)系，采用此原理測(cè)定濾膜孔徑的方法稱(chēng)氣泡壓力法。（2分）

8、DNA 疫苗： 屬于基因藥物中的一種，指使用能夠表達(dá)抗原的基因本身即核酸制成的疫苗（2 分）?；蛞呙邕M(jìn)入人體后，在人體細(xì)胞環(huán)境中表達(dá)出蛋白質(zhì)抗原，持續(xù)刺激人體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生免疫反應(yīng)，達(dá)到預(yù)防疾病的目的。（1 分）

三、單項(xiàng)選擇題（每小題 1 分，共20 分）

1．利用產(chǎn)氨短桿菌發(fā)酵法生產(chǎn)肌苷酸，第一步是用誘變育種的方法篩選缺乏哪種酶的腺嘌呤缺陷型菌株，并在發(fā)酵培養(yǎng)基中提供亞適量的腺嘌呤。 （ A ）

A．SAMP 合成酶 B．SAMP 裂解酶 C．PRPP 轉(zhuǎn)酰胺酶 D．IMP 脫氫酶

2、蛋白質(zhì)類(lèi)物質(zhì)的分離純化往往是多步驟的，其前期處理手段多采用下列哪類(lèi)的方法。 （ B ）

A.分辨率高 B.負(fù)載量大 C.操作簡(jiǎn)便 D.價(jià)廉

3、用大網(wǎng)格高聚物吸附劑吸附的弱酸性物質(zhì)，一般用下列哪種溶液洗（ D ）

A.水 B.高鹽 C.低 pH D. 高 pH

4、凝膠層析中，有時(shí)溶質(zhì)的Kd>1，其原因是 （ B ）

A.凝膠排斥 B.凝膠吸附 C.柱床過(guò)長(zhǎng) D.流速過(guò)低

5、在酸性條件下用下列哪種樹(shù)脂吸附氨基酸有較大的交換容量（ C ） A.羥型陰 B.氯型陰 C.氫型陽(yáng) D.鈉型陽(yáng)

6、親和層析的洗脫過(guò)程中，在流動(dòng)相中加入配基的洗脫方法稱(chēng)作（C）

A. 陰性洗脫 B. 劇烈洗脫 C. 競(jìng)爭(zhēng)洗脫 D. 非競(jìng)爭(zhēng)洗脫

7、當(dāng)向蛋白質(zhì)純?nèi)芤褐屑尤胫行喳}時(shí)，蛋白質(zhì)溶解度（ C ）

A．增大 B. 減小 C. 先增大，后減小 D. 先減小，后增大

8、鹽析法與有機(jī)溶劑沉淀法比較，其優(yōu)點(diǎn)是 （ B ）

A.分辨率高 B.變性作用小 C.雜質(zhì)易除 D.沉淀易分離

9、“類(lèi)似物容易吸附類(lèi)似物”的原則,一般極性吸附劑適宜于從何種溶劑中吸附極性物質(zhì)（B ）

A.極性溶劑 B.非極性溶劑 C.水 D.溶劑

10、能夠除去發(fā)酵液中鈣、鎂、鐵離子的方法是 （ C ）

A. 過(guò)濾 B. 萃取 C. 離子交換 D. 蒸餾

11、下列哪種方法是由于細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成導(dǎo)致細(xì)胞破碎的（ C）

A. 真空干燥 B. 酶解法 C. 凍融法 D. 滲透壓法

12、紅霉素在 pH 9.8 時(shí)的分配系數(shù)（醋酸丁酯/水）為 44.5，若用等體積的醋酸酯進(jìn)行單級(jí)萃取，則理論收率為( A )

A. 97.8% B. 99.32% C. 96.5% D. 95.9%

13、在高效液相色譜中,下列哪種檢測(cè)器不適合于在梯度洗脫時(shí)使用. ( D )

A. 紫外檢測(cè)器 B.熒光檢測(cè)器 C.蒸發(fā)光散射檢測(cè)器 D.示差折光檢測(cè)器

14、某抗生素以醋酸丁酯為流動(dòng)相進(jìn)行 pH 紙層析，酸性條件下比移值大，堿性條下比移值小，則該抗生素為 ( B )

A. 弱堿性 B. 弱酸性 C.強(qiáng)堿性 D.強(qiáng)酸性

15、環(huán)孢菌素 A 是微生物產(chǎn)生的 （ D ）

A. HMG-CoA 還原酶抑制劑 B.β-內(nèi)酰胺酶抑制劑 C.氨基糖苷類(lèi)抗生 D. 免疫抑制劑

16、選用110 樹(shù)脂分離純化鏈霉素，交換時(shí) pH 應(yīng)為（ C ）

A．2～4 B. 4～6 C.6～8 D. 12～14

17、紅霉素以游離分子形式存在時(shí),可用吸附法分離,吸附時(shí)發(fā)酵液的 pH應(yīng)調(diào)節(jié)（ A）A. 大于 7 B. 小于7C. 等于7 D. 2～12

18、從四環(huán)素發(fā)酵液中去除鐵離子,可用 （ B ）

A. 草酸酸化 B. 加黃血鹽 C. 加硫酸鋅 D. 氨水堿化

19、用大腸桿菌作宿主表達(dá)重組 DNA 藥物，缺點(diǎn)是 （ C ）

A.蛋白質(zhì)表達(dá)量低B.生長(zhǎng)慢C.產(chǎn)物無(wú)糖基修飾D.難以獲得工程菌

20、下列藥物哪些是重組 DNA 藥物 （ B ）

A.蛋白質(zhì)工程藥物 B.基因藥物 C.天然生物藥物 D.半合成生物藥物

四、論述題（共26分）

答案：A： 去血紅蛋白（1 分） B： 乙醇（1 分） C： 氯仿（1 分）

D：丙酮（1 分 E：熱變性（1 分）F：60-70°C（1分）G洗脫（1 分）

3、試述雙水相萃取及其影響因素。（6 分）

雙水相萃取技術(shù)(two-aqueous phase extraction) ，又稱(chēng)水溶液兩相分配技術(shù)，它

利用不同的高分子溶液相互混合可產(chǎn)生兩相或多相系統(tǒng)，靜置平衡后，分成互不相

溶的兩個(gè)水相，利用物質(zhì)在互不相溶的兩水相間分配系數(shù)的差異來(lái)進(jìn)行萃取的方法，

稱(chēng)為雙水相萃取法。（3分） 影響因素:成相高聚物濃度-界面張力、成相高聚物的相對(duì)分子質(zhì)量、電化學(xué)分配、疏水反應(yīng)、pH值、溫度。（3分）

4、基因治療中常用的病毒與非病毒載體各有哪些？（7 分）

病毒載體是指用具有感染性的病毒作為哺乳動(dòng)物核苷酸的傳遞系統(tǒng)。

基因治療中常用的病毒載體包括:逆轉(zhuǎn)錄病毒(retrovirus，RV)，腺病毒(adenovirus，

AV)，腺相關(guān)病毒(adeno associated virus，AAV),單純皰疹病毒(herpes simplex virus，

HSV)，痘苗病毒(vaccinia virus，VV)等載體。（4分）

非病毒載體包括裸露 DNA、基因縫合線、脂質(zhì)體、哺乳動(dòng)物人工染色體等載體。（3

分）