常用的標(biāo)記蛋白質(zhì)的方法有攪拌法和透析法兩種。以FITC標(biāo)記為例，攪拌標(biāo)記法為:先將待標(biāo)記的蛋白質(zhì)溶液用0.5ml/LpH9.0的碳酸鹽緩沖液平衡，隨后在磁力攪拌下逐滴加入FITC溶液，在室溫持續(xù)攪拌4~6h后，離心，上清即為標(biāo)記物。此法適用于標(biāo)記體積較大，蛋白含量較高的抗體溶液。優(yōu)點(diǎn)是標(biāo)記時(shí)間短，熒光素用量少。和瑞禧生物小編一起來(lái)看看Cy7熒光標(biāo)記抗體/蛋白試劑盒 (10~100 mg標(biāo)記量)的相關(guān)內(nèi)容。

一.?產(chǎn)品簡(jiǎn)介

Cy7熒光標(biāo)記抗體/蛋白試劑盒可以通過(guò)抗體/蛋白上的伯胺基團(tuán)（如賴氨酸），簡(jiǎn)單、快速地實(shí)現(xiàn)抗體/蛋白與熒光染料的共價(jià)偶聯(lián)。此為通用型試劑盒，適合Cy7熒光標(biāo)記各種分子量不一致的抗體/蛋白。偶聯(lián)在30分鐘內(nèi)即可完成，偶聯(lián)效率可達(dá)70%左右。使用超濾管純化，可快速去除多余的Cy7熒光染料，且不會(huì)損失抗體/蛋白。

二.?試劑盒組成與存儲(chǔ)

收到后將Cy7-mix(含10 % Cy7染料)儲(chǔ)存在-20?C。Coupling Reagent、Cy7-mix溶解液可在+4°C短期保存或-20°C長(zhǎng)期保存。

試劑盒組成數(shù)量保存溫度Cy7-mix (含10 % Cy7染料)10 mg-20 ℃Coupling Reagent2 mL+4 ℃或-20 ℃Cy7-mix溶解液2 mL+4 ℃或-20 ℃超濾管 (3.5kD)2 支室溫

三.?實(shí)驗(yàn)步驟

1. 取待標(biāo)記抗體/蛋白(1~10 mg)，溶解于1 mL純水中，加入100 μL Coupling Reagent，混合均勻待用。

注：抗體/蛋白在1~10 mg內(nèi)均用1mL純水溶解，并加入100 μL Coupling Reagent。超出此范圍，請(qǐng)按比例增減，如0.5 mg抗體/蛋白，建議使用0.5 mL純水溶解并加入50 μL Coupling Reagent。

(以下步驟按標(biāo)記1 mg抗體/蛋白為例)

2. 根據(jù)熒光標(biāo)記需求程度，稱取0.1 ~1 mg Cy7-mix固體加至第1步溶液，充分混合溶解。

注：(a) 若Cy7-mix用量超出1mg，可能導(dǎo)致熒光標(biāo)記過(guò)量，引起熒光部分淬滅;

(b) 若低于1mg的Cy7-mix難以稱取，可先取1 mg Cy7-mix固體溶解于100 μL Cy7-mix溶解液，再按需取Cy7-mix溶液加至第1步溶液。由于Cy7-mix溶解后易分解，溶液須盡快使用且不可保存。

3. 室溫避光反應(yīng)30 min，延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間不影響偶聯(lián)效率。

4. 將反應(yīng)液轉(zhuǎn)移至超濾管，10000 rpm超濾5min，即可除去未反應(yīng)的Cy7-mix，為提高純度，可加入純水重懸抗體/蛋白，重復(fù)超濾1~2次。

5. 使用純水或PBS將超濾管截留下的抗體/蛋白重懸，即得到Cy7熒光標(biāo)記的抗體/蛋白溶液。

四.?注意事項(xiàng)

1. 熒光標(biāo)記前抗體/蛋白中可能含有干擾組分，建議低于以下比例:

干擾組分建議比例甘油< 50%疊氮化鈉< 0.1%含氨基的緩沖液（如Tris）0%pH7.0-8.5伯胺（如氨基酸、乙醇胺等）0%硫醇（如巰基乙醇、DTT等）0%

注：若以上干擾組分超出建議比例，可先通過(guò)超濾管或透析等方式除去干擾成分，再使用本試劑盒進(jìn)行抗體/蛋白熒光標(biāo)記。

2. 偶聯(lián)后的抗體/蛋白應(yīng)避光保存。通常在4 ℃下可保存6~12個(gè)月。如需保存更長(zhǎng)時(shí)間，可加入冷凍保護(hù)劑如50%甘油，在-20℃保存。

RXYWX.2022.7.27