Super Tube 狗腎細(xì)胞 培養(yǎng)傳代信息介紹
細(xì)胞介紹
從表觀正常的成年雌性可卡犬中建立了細(xì)胞株MDCK，從中克隆建立了狗上皮樣細(xì)胞株Super Tube。當(dāng)維持高細(xì)胞濃度時(shí)，Super tube形成大量的小管(據(jù)報(bào)道，24孔板的每孔鋪7x105細(xì)胞，３天內(nèi)就能形成小管)。要形成小管，細(xì)胞需要每天兩次換液以提供足夠養(yǎng)分。與原始細(xì)胞株相比，Super Tube的c-AMP的檢測(cè)水平低得多，在forskolin刺激下讀出的腺苷環(huán)化酶水平也低；它的跨上皮抗性也比Super Dome 和 MDCK都低。
基本信息
細(xì)胞別稱：MDCK supertube;SuperTube
細(xì)胞來源：正常犬腎
細(xì)胞形態(tài)：上皮細(xì)胞樣
生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)
安全等級(jí)：BSL1
包裝規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝
推薦換液：2~3次/周
傳代比例：1:3~1:4
保藏機(jī)構(gòu)：ATCC;CRL-2285
培養(yǎng)保存
培養(yǎng)體系：DMEM/F12(TM025)+0.05mM NEAA+10%FBS(TS500)
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%；溫度：37℃
凍存條件：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS(TS500)+5%DMSO
傳代步驟
如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
收到細(xì)胞后首次傳代推薦將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新的含6ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，建議凍存一支備用，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2到1:4的比例進(jìn)行。
凍存步驟
細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗一遍后加入1ml胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入1ml含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
4min 1000rpm 離心去掉上清。加1ml血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入血清和DMSO，輕輕混勻，DMSO終濃度為5%，細(xì)胞密度不低于1x10(6)/ml，每支凍存管凍存1ml細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。
將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
（以上操作均以T25瓶培養(yǎng)細(xì)胞為例）
細(xì)胞用途
僅供科研使用。
