產(chǎn)品介紹：

本FITC標(biāo)記試劑盒提供了FITC快速標(biāo)記所需全部試劑，用于含有伯氨基（NH2-）的蛋白/抗體/多肽或者其他大分子的標(biāo)記,待標(biāo)記物上的賴氨酸殘基的游離ε-氨基可與FITC 發(fā)生親核反應(yīng),形成硫脲連接而共價(jià)結(jié)合,形成的偶聯(lián)物的穩(wěn)定性很好，其反應(yīng)原理如下:

FITC清除指示劑為藍(lán)色，其為FITC的結(jié)構(gòu)類似物，其數(shù)量為加入的FITC的20倍以上，在通過超濾管離心清除游離FITC的時(shí)候，如果超濾管中沒有藍(lán)色了，游離的FITC基本上被清除完畢。

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試劑盒組份

不同規(guī)格組分含量

活性FITC

2mg

4mg

6mg

超 濾 管

1支

助溶劑(DMSO)

1.5mL

3mL

4.5mL

標(biāo)記緩沖液

30mL

60mL

90mL

清除指示劑

1mL

2ml

3ml

標(biāo)記物保存液

2mL

4ml

10ml

產(chǎn)品特點(diǎn)：

l通過離心脫鹽和去除游離的FITC,無需透析或者凝膠過濾；

l本試劑盒配備指示劑，確保游離FITC去除完全;

l?使用方法簡單，無需額外準(zhǔn)備試劑.

FITC標(biāo)記使用量的計(jì)算：

每個(gè)反應(yīng)中FITC試劑的使用量取決于待標(biāo)記蛋白質(zhì)氨基數(shù)目和總量。例如,通過我們實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分析表明,標(biāo)記2mg/ml 的抗體（IgG ，150KD）,每毫升抗體溶液（2mg/mL）加入100μL的FITC(2mg/mL) 能達(dá)到最佳標(biāo)記效果效果;其他蛋白的標(biāo)記可以根據(jù)實(shí)際情況,參照此比例類推。?

實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備：

1.仔細(xì)閱讀使用說明書。

2.提前20min 從冰箱中取出試劑盒，使試劑盒各組分平衡至室溫；

3.用FITC助溶劑（DMSO，使用前需要放在室溫融化）溶解FITC。

?特別提示：

A.溶解的活好FITC最好一次性使用完，如果使用不完可以密封放在-20℃的冰箱內(nèi)，一周內(nèi)可以使用，但是標(biāo)記效率會降低；

B.FITC助溶劑使用完之后需要立即密封保存，防止吸潮。

操作步驟：（本操作步驟按照 1mg抗體的量進(jìn)行標(biāo)記）

1.取1mg 待標(biāo)記抗體于超濾管中，并加入不超過超濾管最大體積的標(biāo)記緩沖液， 12,000 g 離心 10min；可以重復(fù)此步驟多次；最后一次超濾完成，可以加入適量標(biāo)記緩沖液調(diào)整抗體的濃度到2mg/mL左右；

A.超濾管的最大體積和最大截留分子量，本實(shí)例超濾管的最大體積為 0.5mL；

B.如果待標(biāo)記抗體濃度低時(shí)，可先超濾離心濃縮；

C.如果待標(biāo)記物含有游離的氨基（Tris,氨基酸或者其他干擾物，需要用標(biāo)記緩沖液反復(fù)超濾確保其去除干凈）。

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2.加入溶解的FITC?50μL至上述超濾管中，并輕輕吹打混勻。放入37℃恒溫箱中避光溫育 60min以上；

3.標(biāo)記結(jié)束以后加入 1/10體積的FITC清除指示劑至上述超濾管中；

4.12,000g 離心 10min；

5.加入適量標(biāo)記緩沖液至上述超濾管中，并輕輕吹打混勻，12,000g 離心 10min。并重復(fù)操作多次，直至超濾管中沒有藍(lán)色，未標(biāo)記的FITC被徹底清除干凈；收集超濾管中的溶液，即為FITC標(biāo)記抗體。

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標(biāo)記偶聯(lián)比率的計(jì)算:

C是某個(gè)蛋白的一個(gè)常數(shù)；

MW是蛋白的分子量；

389是FITC的分子量；

195是偶聯(lián)的FITC在490nm（PH13.0）情況下1mg/ml的吸光值；

(0.35ⅹA495)是FITC在280nm情況下吸光值的校正系數(shù)；

E0.1%是1.0 mg/ml的蛋白在280nm的吸光值。

選購之前客戶需要根據(jù)待標(biāo)記物的分子量大小和標(biāo)記量選擇最適宜的型號

??產(chǎn)品編號

最大標(biāo)記體積

標(biāo)記物最小分子量

可標(biāo)抗體

ARL0021K-3K-0.5mL

0.5mL

3kDa

0.2-10mg

ARL0021K-3K-4.0mL

4.0mL

3kDa

1.0-80mg

ARL0021K-3K-15mL

15mL

3kDa

5-300mg

ARL0021K-10K-0.5mL

0.5mL

10kDa

0.2-10mg

ARL0021K-10K-4.0mL

4.0mL

10kDa

1.0-80mg

ARL0021K-10K-15mL

15mL

10kDa

5-300mg

ARL0021K-30K-0.5mL

0.5mL

30kDa

0.2-10mg

ARL0021K-30K-4.0mL

4.0mL

30kDa

1.0-80mg

ARL0021K-30K-15mL

15mL

30kDa

5-300mg

ARL0021K-50K-0.5mL

0.5mL

50kDa

0.2-10mg

ARL0021K-50K-4.0mL

4.0mL

50kDa

1.0-80mg

ARL0021K-50K-15mL

15mL

50kDa

5-300mg

ARL0021K-100K-0.5mL

0.5mL

100kDa

0.2-10mg

ARL0021K-100K-4.0mL

4.0mL

100kDa

1.0-80mg

ARL0021K-100K-15mL

15mL

100kDa

5-300mg

注意事項(xiàng)：

1.本試劑盒適用于所有含有ε-氨基（NH2-）的大分子物質(zhì)的標(biāo)記，（蛋白，抗體，以及其他含有伯氨基（NH2-）的化合物分子），具體標(biāo)記比例根據(jù)待標(biāo)記物中氨基的數(shù)量確定；

2. 本試劑盒中的FITC助溶劑為DMSO ，使用完畢后要密封干燥保存；

3. 本試劑盒配備了標(biāo)記物保存液，實(shí)驗(yàn)人員也可以根據(jù)被標(biāo)記物的特點(diǎn)不同，選擇更適合的保存液。

4. 本試劑盒未開封前的有效期為18個(gè)月，請?jiān)谟行趦?nèi)使用。

5. 本系列試劑盒提供的為超濾管分為不同的截留分子量和不同的最大容積，客戶需要根據(jù)自己要標(biāo)記的物質(zhì)的分子量大小和標(biāo)記量選擇適合的型號；

*本試劑僅供實(shí)驗(yàn)室研究使用