艾美捷CompTech40 %甘油中的C1q蛋白：

名稱(chēng)：?40 %甘油中的C1q蛋白

編號(hào)：?A100

規(guī)格：?1000 μg/vial

濃度：?1.0 mg/mL (實(shí)際濃度見(jiàn)分析證書(shū))

類(lèi)型?冷凍液體

活動(dòng)：?> 1,000,000 C1H50 units/mg

純度：?> 98%的SDS頁(yè)面

緩沖區(qū)：?40%甘油，10 mM HEPES，300 mM氯化鈉，pH 7。2

消缺系數(shù)。?A28 0 nm = 為 0 . 6 8 , 1 . 0 m g/m l

分子量：?410000Da ( 18鏈)

防腐劑：?無(wú)，0.22μm過(guò)濾。

存儲(chǔ)：?- 7 0oC或以下。避免凍融。

根源?正常的人類(lèi)血清?(經(jīng)認(rèn)證的HBsAg、HTLV-I/II、STS和HCV、 HIV1和HIV-II抗體檢測(cè)均為陰性) 。

預(yù)防措施?在處理人類(lèi)血液制品時(shí)要采取常規(guī)的預(yù)防措施。

一般說(shuō)明

從C1r和C1以及其他穩(wěn)定蛋白中分離出來(lái)的C1q往往很容易聚集。由于它在許?多研究實(shí)驗(yàn)室中被分離和研究，許多緩沖液被用于穩(wěn)定濃縮的C1q和防止聚集。大約?一半的科學(xué)家喜歡高鹽，另一部分科學(xué)家喜歡儲(chǔ)存緩沖液中40%的甘油。因此，????CompTech在高鹽緩沖液A099和高鹽緩沖液A100加40%甘油中均銷(xiāo)售1?mg/mL的C1q)。?該公司沒(méi)有檢測(cè)到在功能活性、存儲(chǔ)穩(wěn)定性或聚集性方面的可測(cè)量的差異，但在研?究界仍然存在強(qiáng)烈的偏好。

C1q是從正常人血漿中純化出來(lái)的。C1q是C1復(fù)合物的一部分，該復(fù)合物是級(jí)?聯(lián)反應(yīng)中的第一個(gè)補(bǔ)體成分，稱(chēng)為經(jīng)典補(bǔ)體途徑。C1實(shí)際上是三種不同蛋白質(zhì) (C1q?、C1r和C1) 結(jié)合在鈣依賴(lài)復(fù)合物中的非共價(jià)組裝。C1q有6個(gè)延伸的臂，每個(gè)臂的末?端都有一個(gè)結(jié)構(gòu)域，與免疫球蛋白的Fc結(jié)構(gòu)域結(jié)合。當(dāng)抗體與抗原結(jié)合形成免疫復(fù)合?物時(shí)，它們聚集在一起，使C1q的六個(gè)臂中的兩個(gè)或多個(gè)與抗體的Fc結(jié)構(gòu)域結(jié)合，如?IgG或IgM。多個(gè)臂與免疫復(fù)合物的結(jié)合導(dǎo)致復(fù)合物中的兩個(gè)C1r蛋白?(蛋白酶酶原)??自動(dòng)激活產(chǎn)生兩個(gè)C1r蛋白酶，切割并激活復(fù)合物中的兩個(gè)c1蛋白酶酶原。活化的C1s?裂解補(bǔ)體成分C4，釋放C4a，并啟動(dòng)C4b與活化表面的共價(jià)附著在活化表面。激活的??C1s也能切割C2，C2的較大片段與表面附著的C4b結(jié)合，形成C4b，C2a，這是經(jīng)典途徑?的C3/C5轉(zhuǎn)化酶。

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物理特性和結(jié)構(gòu)

C1q是一個(gè)由18個(gè)多肽鏈組成的高分子量復(fù)合物。C1q的六個(gè)臂中的每一個(gè)都?包含三條鏈，一條a鏈?(26000道爾頓) ，一條B鏈?(25000道爾頓) 和一條C鏈?(2400?0道爾頓) 。這三條鏈被卷曲成類(lèi)膠原蛋白

三螺旋結(jié)構(gòu)大約超過(guò)其一半的長(zhǎng)度。這個(gè)膠原蛋白區(qū)域的一半形成了一個(gè)中心核心，?在這里所有的18條鏈聚集在一起。這些鏈通過(guò)A-B和C-C模式中的二硫化物連接在這個(gè)?核心中。在膠原蛋白區(qū)域的中心有一個(gè)彎曲，使手臂彼此向外伸展。膠原臂遠(yuǎn)端的球?狀頭具有免疫球蛋白Fc結(jié)構(gòu)域的結(jié)合位點(diǎn)。

C1復(fù)合物由一個(gè)C1q分子?(410000道爾頓) 、兩個(gè)C1r分子?(92000道爾頓)?和?兩個(gè)C1s分子?(86000道爾頓) 組成。該復(fù)合物在鈣的存在下是穩(wěn)定的，但如果鈣被去?除，很容易解離。當(dāng)C1被激活時(shí)，C1r和C1s亞基由于蛋白水解激活而分別分裂成兩個(gè)?鏈分子。因此，C1的SDS凝膠圖樣非常復(fù)雜。

功能

C1q的生物學(xué)功能在上述一般描述和物理特性部分中描述。C1q的功能活性可以?用C1q耗盡的血清?(CompTech?#A300) 和EA細(xì)胞?(CompTech?#B200) 來(lái)檢測(cè)。這些檢?測(cè)方法對(duì)C1q極其敏感，在測(cè)量EA細(xì)胞裂解的檢測(cè)方法中，通常產(chǎn)生50%的裂解，小于?2?ng的裂解(Dodds，A。W.和Sim，R。B. (1997) ；摩根，B。P.

(2000)).

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測(cè)定

經(jīng)典途徑活性的單位是CH50。一個(gè)類(lèi)似的單元，C1qH50，被用來(lái)定量C1q的活?性。一個(gè)C1qH50單元是溶解3?x?10的50%所需的功能性C1q的量7當(dāng)一定量的C1q?(Comp Tech?#A099或A100) 與5-20μL的C1q-Dpl在GVB中孵育時(shí)，EA細(xì)胞?(抗體致敏的綿羊紅?細(xì)胞?(CompTech?#B200) )?++?(比較技術(shù)#B100) ，總體積為500μL，30?min，37????minoC.這個(gè)數(shù)量的C1q表明了對(duì)C1q檢測(cè)的敏感性，通常為1?ng?C1q與10μL?C1q-Dpl ?(Dodds，A。W.和Sim，R。B. (1997) ；摩根，B。P. (2000)).有關(guān)批次的具體值，?請(qǐng)參見(jiàn)分析證書(shū)。

應(yīng)用程序

C1q用于覆蓋ELISA板，以捕獲和定量臨床樣本中的免疫復(fù)合物。許多商業(yè)公司?銷(xiāo)售用于免疫復(fù)合物檢測(cè)和定量的診斷試劑盒。這些試劑盒是基于C1q與免疫復(fù)合物?的良好結(jié)合的能力，但不與單體免疫球蛋白的顯著結(jié)合。

參考文獻(xiàn)

Dodds, A.W. and Sim, R.B. editors (1997) Complement. A Practical Approach (ISBN 019963539) Oxford University Press, Oxford.

Morgan, B.P. ed. (2000) Complement Methods and Protocols. (ISBN 0-89603-654-5) Humana Press, Inc., Totowa, New Jersey.

Ross, G.D. (1986) Immunobiology of the Complement System. (ISBN 0-12-5976402) Academic Press, Orlando.

Rother, K., Till, G.O., and H?nsch, G.M. (1998) The Complement System. (ISBN 3-540-61894-5) Springer-Verlag, Heidelberg.

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