? ? ? 今天百螢為大家介紹細(xì)胞轉(zhuǎn)染的常見方法，以及它們之間的優(yōu)缺點(diǎn)比較。細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法包括DEAE－葡聚糖法、磷酸鈣法、陽離子脂質(zhì)體法、陽離子聚合物、病毒介導(dǎo)法、Biolistic 顆粒傳遞法 （基因槍粒子轟擊法）、顯微注射法、電穿孔法等。感興趣的小伙伴一起來看看吧！

1.DEAE-葡聚糖法

原理：帶正電的DEAE-葡聚糖與核酸帶負(fù)電的磷酸骨架相互作用形成的復(fù)合物被細(xì)胞內(nèi)吞。

主要應(yīng)用：順勢(shì)轉(zhuǎn)染 。?

特點(diǎn)：相對(duì)簡(jiǎn)便、重復(fù)比磷酸鈣好，但對(duì)細(xì)胞有一定的毒副作用，轉(zhuǎn)染時(shí)需除血清且一般只用于BSC-1，CV-1，COS細(xì)胞系。

2.磷酸鈣法

原理：磷酸鈣DNA復(fù)合物吸附細(xì)胞膜被細(xì)胞內(nèi)吞。

主要應(yīng)用：穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，順勢(shì)轉(zhuǎn)染。

特點(diǎn)：不適用于原代細(xì)胞（所需的DNA濃度較高），操作簡(jiǎn)便但重復(fù)性差，有些細(xì)胞不適用
細(xì)胞建議用CSCL梯度離心，轉(zhuǎn)染是拷貝數(shù)較多。

3.陽離子脂質(zhì)體法

原理：帶正電的脂質(zhì)體與核酸帶負(fù)電的磷酸基團(tuán)形成復(fù)合物，然后脂質(zhì)體上剩余的電核與細(xì)胞膜上的唾液酸殘基的負(fù)電核結(jié)合；另一種解釋是通過細(xì)胞是內(nèi)吞作用而被進(jìn)入細(xì)胞。(若DNA濃度過高，中和脂質(zhì)體表面電核，而降低了與細(xì)胞的結(jié)合能力)。

主要應(yīng)用：穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，瞬時(shí)轉(zhuǎn)染，所有細(xì)胞。

特點(diǎn)：使用方法簡(jiǎn)單，可攜帶大片段DNA，通用于各種類型的裸露DNA或RNA，能轉(zhuǎn)染各種類型的細(xì)胞，沒有免疫原性。雖在體外基因轉(zhuǎn)染中有很高的效率，但在體內(nèi)，能被血清，并在肺組織內(nèi)累積，誘發(fā)強(qiáng)烈的抗炎反應(yīng)，導(dǎo)致高水平的毒性，這在很大程度上限制了其應(yīng)用。

4.陽離子聚合物

原理：帶正電的聚合物與核酸帶負(fù)電的磷酸基團(tuán)形成帶正電的復(fù)合物后與細(xì)胞表面帶負(fù)電的蛋白多糖相互作用，并通過內(nèi)吞作用進(jìn)入細(xì)胞。

主要應(yīng)用：穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，瞬時(shí)轉(zhuǎn)染，所有細(xì)胞。

特點(diǎn)：除了具有陽離子脂質(zhì)體的轉(zhuǎn)染效率高，操作簡(jiǎn)單，適用范圍廣，重復(fù)性好等特點(diǎn)外，還具有在體內(nèi)，轉(zhuǎn)染效率高，細(xì)胞毒性低等特點(diǎn)，是新一代的轉(zhuǎn)染試劑。

5.病毒介導(dǎo)法

（1）逆轉(zhuǎn)錄病毒(RNA)

原理：通過病毒中膜糖蛋白和宿主細(xì)胞表面的受體相互作用而進(jìn)入宿主細(xì)胞，之后反轉(zhuǎn)入酶啟動(dòng)合成DNA并隨機(jī)整合到宿主基因組中。

主要應(yīng)用：穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，特定宿主細(xì)胞。

特點(diǎn)：可用于難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞、原代細(xì)胞，體內(nèi)細(xì)胞等，但攜帶基因不能太大（<8kb），細(xì)胞需處分裂期，需考慮因素。

（2）腺病毒(雙鏈DNA)

原理：先和細(xì)胞表面的受體結(jié)合，繼而在αv整合素介導(dǎo)下被細(xì)胞內(nèi)吞。

主要應(yīng)用：瞬時(shí)轉(zhuǎn)染，特定宿主細(xì)胞。

特點(diǎn)：可用于難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞，需考慮因素。

6.Biolistic 顆粒傳遞法 （基因槍粒子轟擊法）

原理：將DNA用顯微重金屬顆粒沉淀，再將包被好的顆粒用彈道裝置投射入細(xì)胞，DNA在胞內(nèi)逐步釋放、表達(dá)。

主要應(yīng)用：瞬時(shí)性轉(zhuǎn)染，穩(wěn)定轉(zhuǎn)染。

特點(diǎn)：可用于：人的表皮細(xì)胞，纖維原細(xì)胞，淋巴細(xì)胞系以及原代細(xì)胞。

7.顯微注射法

原理：用顯微操作將DNA直接注入靶細(xì)胞核。

主要應(yīng)用：穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，瞬時(shí)轉(zhuǎn)染。

特點(diǎn)：轉(zhuǎn)染細(xì)胞數(shù)有限，多用于工程改造或轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的胚胎細(xì)胞。

8.電穿孔法

原理：高脈沖電壓破壞細(xì)胞膜電位，DNA通過膜上形成的小孔導(dǎo)入。

主要應(yīng)用：穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，瞬時(shí)轉(zhuǎn)染，所有細(xì)胞。

特點(diǎn)：適用性廣，除了質(zhì)粒外，還可轉(zhuǎn)染大的基因組（>65kb）但細(xì)胞致死率高，DNA和細(xì)胞用量大， 需根據(jù)不同細(xì)胞類型優(yōu)化電穿孔實(shí)驗(yàn)條件，拷貝數(shù)較少1-20。

? ? 目前市場(chǎng)上大多數(shù)轉(zhuǎn)染試劑均采用陽離子脂質(zhì)體法，百螢出售的Transfectamine 5000轉(zhuǎn)染試劑也采用該方法，它毒性更低，并且使轉(zhuǎn)染細(xì)胞具有更高的生存能力。與相同方法下的的大多數(shù)轉(zhuǎn)染試劑相比，Transfectamine 5000更易于使用，并且不需要特殊的培養(yǎng)基。