概述：

MTT細(xì)胞增殖檢測試劑盒（MTT Cell Proliferation?Assay）被廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性檢測。MTT可以被線粒體內(nèi)的一些脫氫酶還原生成結(jié)晶狀的深紫色產(chǎn)物Formazan，在特定溶劑存在的情況下，可以被完全溶解，然后通過酶標(biāo)儀可以測定570 nm波長附近的吸光度。

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艾美捷CytoSelectMTT細(xì)胞增殖檢測提供了用于測量和監(jiān)測細(xì)胞增殖的比色格式。該試劑盒包含足夠的試劑，可用于評估96孔板中的960個(gè)測定或24孔板中的192個(gè)測定?？梢詫⒓?xì)胞鋪板，然后用影響增殖的化合物或試劑處理。然后用增殖試劑檢測細(xì)胞，通過細(xì)胞還原酶將其在活細(xì)胞中從黃色的四唑MTT轉(zhuǎn)變?yōu)樽仙募譵az形式（圖1）。細(xì)胞增殖的增加伴隨著信號的增加，而細(xì)胞增殖（和信號）的下降可以表明化合物的毒性作用或次佳的培養(yǎng)條件。該測定原理是基本的，并且可以應(yīng)用于大多數(shù)真核細(xì)胞系，包括粘附和非粘附細(xì)胞以及某些組織。這種細(xì)胞增殖試劑可用于檢測細(xì)菌，酵母，真菌，原生動(dòng)物以及培養(yǎng)的哺乳動(dòng)物和魚類細(xì)胞中的增殖。

圖1：活細(xì)胞中黃色MTT和紫色福爾馬林產(chǎn)物的化學(xué)結(jié)構(gòu)。

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艾美捷MTT細(xì)胞增殖檢測試劑盒組分：

1. MTT Cell Proliferation Assay Reagent (Part No. 125201): One 10 mL bottle of MTT reagent.

2. Detergent Solution (Part No. 125202): One 100 mL bottle of Detergent Solution.

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艾美捷MTT細(xì)胞增殖檢測試劑盒測定方案：

1.制備含有0.1-1.0 x 106的細(xì)胞懸液培養(yǎng)基中的細(xì)胞/ml。

2.將每孔100μL加入96孔細(xì)胞培養(yǎng)板或每孔500μL加入24孔細(xì)胞培養(yǎng)物中有或沒有待測化合物的板。細(xì)胞在37°C和5%培養(yǎng)24-96小時(shí)加濕培養(yǎng)箱中的二氧化碳。

3.加入10μlCytoSelect??MTT細(xì)胞增殖測定試劑，如果使用96-孔板，或24孔板的每個(gè)孔50μL。

4.在37°C和5%CO2下孵育平板3-4小時(shí)，直至可見紫色沉淀（細(xì)胞在光學(xué)顯微鏡下可以更精確地觀察到沉淀物）

5.在96孔板的每孔中加入100μL去污劑溶液，或在24孔板的每孔中加入500μL去污劑溶液盤子。

6.在室溫下孵育2小時(shí)至避光過夜。

注意：在井中與洗滌劑溶液長時(shí)間孵育可能導(dǎo)致沉淀或渾濁可以增加背景。如果觀察到沉淀，將板在37℃加熱10-20分鐘并攪拌溶解沉淀物。

7.使用540-570nm作為主波長讀取吸光度。

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MTT細(xì)胞增殖檢測試劑盒引用文獻(xiàn)（部分）：

1. Uranowska, K. et al. (2021). Expression of chondroitin sulfate proteoglycan 4 (CSPG4) in melanoma cells is downregulated upon inhibition of BRAF. Oncol Rep. 45(4):14. doi:10.3892/or.2021.7965.

2. Housein, Z. et al. (2021). In vitro anticancer activity of hydrogen sulfide and nitric oxide alongside

nickel nanoparticle and novel mutations in their genes in CRC patients. Sci Rep. 11(1):2536. doi:10.1038/s41598-021-82244-x.

3.?Yoshiya, S. et al. (2020). Impact of Capicua on Pancreatic Cancer Progression. Ann Surg Oncol.doi: 10.1245/s10434-020-09339-z.