由于環(huán)境因素和細(xì)胞內(nèi)正常的新陳代謝過程，DNA損傷每天以每個(gè)細(xì)胞1000到100萬個(gè)分子損傷的速度發(fā)生。雖然這只占人類基因組約60億個(gè)堿基(30億個(gè)堿基對(duì))的一小部分，但關(guān)鍵基因的未修復(fù)損傷可能會(huì)阻礙細(xì)胞發(fā)揮其功能的能力，并顯著增加癌癥的可能性。

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彗星實(shí)驗(yàn)（Comet assay）也被稱為單細(xì)胞凝膠電泳實(shí)驗(yàn)（Single cell gel electrophoresis，SCGE），是一種超靈敏的單細(xì)胞水平上檢測(cè)DNA損傷的技術(shù)，可以檢測(cè)到1.657×10-15中0.1個(gè)DNA的斷裂,甚至檢出自然光照射體外淋巴細(xì)胞1h后引起的DNA損傷。在電泳場(chǎng)下，損傷的細(xì)胞DNA(包含碎片和鏈斷裂)從完整的DNA中分離出來，在顯微鏡下形成典型的“彗星尾巴”形狀。DNA損傷的程度通常是通過測(cè)量彗星尾巴來目測(cè)的，也可以使用圖像分析軟件來測(cè)量各種參數(shù)。

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Cell Biolabs【彗星分析應(yīng)用領(lǐng)域】：主要還是在細(xì)胞凋亡的研究，腫瘤/癌癥研究，毒理學(xué)研究，環(huán)境污染監(jiān)測(cè)，臨床診斷與治療監(jiān)測(cè)。

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接下來，艾美捷?Cell Biolabs會(huì)給大家分享一下彗星分析實(shí)驗(yàn)（Comet assay）怎么做？

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步：Cell Biolabs彗星分析試劑盒不可少（可根據(jù)實(shí)驗(yàn)用量，選擇不同的規(guī)格：）

最常用：Comet Assay Kits, 3-Well (3孔玻片)

高通量篩選：Comet Assay Kits, 96-Well（96孔玻片）

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艾美捷?Cell Biolabs丨Comet Assay kit彗星分析試劑盒內(nèi)提供了彗星分析所需的所有必需試劑，包括裂解液、彗星分析低熔點(diǎn)凝膠、DNA熒光染料、彗星分析玻片以及其它試劑。

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第二步：彗星分析電泳模式選擇：

電泳模式?檢測(cè)類型?電泳時(shí)間?說明

TBE電泳（中性電泳）——檢測(cè)單鏈和雙鏈DNA的斷裂——推薦10-15 mins——分析細(xì)胞凋亡的shou選方法，可使用尾巴長(zhǎng)度而非尾矩進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。

堿性電泳——檢測(cè)單鏈和雙鏈DNA的斷裂，AP位點(diǎn)損傷在內(nèi)的所有DNA?損傷——推薦15-30mins——靈敏度zui高！

?*?實(shí)驗(yàn)過程中的各類緩沖液都需要4℃預(yù)冷。

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關(guān)于電泳電壓：以上2種電泳模式，均推薦參考實(shí)驗(yàn)室電泳槽兩J間的舉例，按照1V/cm的標(biāo)準(zhǔn)設(shè)置電壓。舉例，如果電泳槽兩J舉例是35cm，那么你需要使用35V的電壓來執(zhí)行電泳。

實(shí)驗(yàn)環(huán)境：為避免紫外線對(duì)細(xì)胞樣品造成額外損害，請(qǐng)?jiān)谌豕鈼l件下進(jìn)行。

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第三步：彗星分析的典型結(jié)果樣式

如上圖，左側(cè)是健康的Jurkat細(xì)胞（未處理）；右側(cè)是使用20 uM Etoposide（依托泊苷）處理4小時(shí)的Jurkat細(xì)胞?！倦娪緱l件：堿性電泳，15mins】

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第四步：彗星分析結(jié)果計(jì)算

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通過測(cè)量細(xì)胞核遺傳物質(zhì)（“彗頭”）與產(chǎn)生的“尾巴”之間的位移，可以量化DNA損傷。 尾矩（Tail Moment）和尾巴DNA％（Tail DNA%?）是分析彗星分析結(jié)果的兩個(gè)最常見的參數(shù)。 每個(gè)樣品至少應(yīng)分析50 -100個(gè)細(xì)胞。考慮到遺傳物質(zhì)的遷移以及尾巴中DNA的相對(duì)數(shù)量，通常建議使用尾矩作為評(píng)估DNA損傷的指標(biāo)。

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Cell Biolabs?配套彗星實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析軟件：

軟件名稱???????????????說明

OpenComet?免費(fèi)；是Image J軟件的一款彗星分析插件

CaspLab?（CASP）?免費(fèi)；獨(dú)立軟件

Comet Assay IV?付費(fèi)軟件；可試用1周

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艾美捷科技是Cell Biolabs的中國(guó)代理商，為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的彗星分析試劑盒。