（1）抗體染色不充分

增加抗體濃度，延長孵育時間。

（2）酶失活

直接將酶和底物進行混合，如果不顯色則說明酶失活了。選擇在有效期內(nèi)、有活性的酶聯(lián)物。

（3）標(biāo)本中不含靶蛋白或靶蛋白含量太低

設(shè)置陽性對照，如果陽性對照有結(jié)果，但標(biāo)本沒有則可能是標(biāo)本中不含靶蛋白或靶蛋白含量太低?？煽紤]增加標(biāo)本上樣量解決靶蛋白含量低的原因。

（4）試劑不匹配

一抗與組織種屬，一抗與二抗或/和底物與酶系統(tǒng)之間不匹配。通過設(shè)置內(nèi)參照可以驗證二級檢測系統(tǒng)的有效性。

（5）一抗失效

選擇在有效期內(nèi)抗體；并選擇現(xiàn)配現(xiàn)用的工作液。

（6）HRP抑制劑

所用溶液和容器中避免含有疊氮化鈉。