癌癥一直是我國最為嚴(yán)重的公共衛(wèi)生事件，同時也影響個人的正常生活和工作。由于統(tǒng)計的滯后性，在2016年統(tǒng)計數(shù)據(jù)中（圖1所示），406萬癌癥病人中發(fā)生病例最多的是肺癌，達(dá)到 82.8萬人[1]。肺癌目前是全世界癌癥死因的第一名，且每年人數(shù)都在上升，因此肺癌是醫(yī)學(xué)領(lǐng)域研究的重點(diǎn)對象，靶向治療成為臨床研究一項(xiàng)不可或缺的技術(shù)手段，隨著靶點(diǎn)精準(zhǔn)治療研究的不斷推進(jìn)，肺癌逐漸成為臨床可控的疾病，相比化療時代，延長了晚期患者的生存時間。依據(jù)EGFR、ALK、ROS1等靶點(diǎn)的特點(diǎn)，相關(guān)藥物已被生產(chǎn)出來并應(yīng)用到臨床治療中，但由于靶向治療費(fèi)用高昂，讓許多患者望而卻步，因此能否發(fā)現(xiàn)并應(yīng)用更多的靶位點(diǎn)成為關(guān)鍵問題，這一期介紹2022年肺癌研究中3個新的熱門靶點(diǎn)。雌激素相關(guān)受體α（estrogen-related receptor α, ERRα），白細(xì)胞受體酪氨酸激酶（ leukocyte tyrosine kinase，LTK）和EMSY轉(zhuǎn)錄抑制因子（EMSY transcriptional repressor，EMSY）。

雌激素相關(guān)受體α（estrogen-related receptor α, ERRα）

雌激素相關(guān)受體（estrogen-related receptors, ERRs）家族有三個亞型α、β和γ，該類蛋白屬于孤核受體大家族一員，它們參與肌肉分化，骨骼再生、免疫系統(tǒng)調(diào)控、基因調(diào)控和能量代謝等等[2]。最早的ERRs是在cDNA文庫篩選中，根據(jù)人類雌激素受體α（estrogen receptor α, ERα）的DNA結(jié)合域序列的相似性來篩選出的類固醇受體[3]。ERRs的基本結(jié)構(gòu)（圖2A所示），包括一個激活功能結(jié)構(gòu)域1（AF1），一個DNA結(jié)合域（DBD）、一個配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域（LBD）和一個激活功能結(jié)構(gòu)域2結(jié)構(gòu)域（AF2）。ERRs的三個亞型α、β和γ的4個結(jié)構(gòu)域具有相對高的保守性（如圖2B所示）。正常的ERRs參與著細(xì)胞各種代謝，維持細(xì)胞穩(wěn)態(tài)，最近一篇綜述總結(jié)了近年的研究后發(fā)現(xiàn)，異常表達(dá)的ERRs會成為腫瘤的幫兇。

其中雌激素相關(guān)受體α（estrogen-related receptor α, ERRα）盡管一開始就被定義為孤核受體，便很快有相關(guān)研究證明ERRα有其他對應(yīng)配體結(jié)合參與基因調(diào)控，但是它被定義為孤核受體并一直沿用至今。ERRα參與了雌激素依賴和非依賴性兩種方式的腫瘤發(fā)生過程。ERRα的異常表達(dá)與乳腺癌、前列腺癌、非小細(xì)胞肺癌等癌癥相關(guān)[4]。因此ERRα也逐漸作為一個癌癥治療的潛在靶點(diǎn)。最近的一個研究發(fā)現(xiàn)，ERRα再表達(dá)能通過激活EGFR/Src/Erk/SP1信號通路（如圖3所示）來增加非小細(xì)胞肺癌的耐藥性，使EGFR抑制劑EGFR-TKIs藥效減弱[5]。文章通過EGFR抑制劑EGFR-TKIs篩選出耐藥肺癌細(xì)胞株，鑒定出這些耐藥肺癌細(xì)胞株的EGFR/Src/Erk/SP1信號通路的下游蛋白ERRα高表達(dá)。?Lovastatin下調(diào)膽固醇水平或者ERRα的抑制劑XCT790阻斷通路都能有效抑制耐藥肺癌細(xì)胞生長。還有2023年最新的一個研究，Avinash等人開發(fā)了BipotentR一種蛋白組學(xué)方法成功預(yù)測并驗(yàn)證ERRα耐藥性是除了能量代謝途徑外，還可以通過抑制兩條免疫途徑：a.細(xì)胞因子誘導(dǎo)，引起促炎巨噬細(xì)胞極化；b.?抗原呈遞刺激，引導(dǎo)CD8 +T細(xì)胞進(jìn)入腫瘤[6]。目前已有較為成熟的ERRα敲除的動物及細(xì)胞模型供研究[7]。提供CRISPR/Cas9敲除ERRα技術(shù)，提供缺乏ERRα基因型的穩(wěn)定細(xì)胞模型，為實(shí)驗(yàn)提供好的平臺，用于探究ERRα其他功能及在各類疾病中擔(dān)任的角色，如肌肉分化、免疫系統(tǒng)、骨骼再生和癌癥發(fā)生等等。

白細(xì)胞受體酪氨酸激酶（?leukocyte tyrosine kinase，LTK）

染色體重排導(dǎo)致基因融合是一個重要的致癌驅(qū)動因素，在不同的腫瘤類型中，融合的基因不盡相同。最近在《自然》的一篇文章中，Izumi等人發(fā)現(xiàn)CLIP1-LTK融合蛋白（圖4所示）而非單獨(dú)的LTK蛋白，在肺癌中是引起癌癥發(fā)生的因素，且占肺癌病例比例有0.4%[8]。作者通過使用LTK5’橙色和3’綠色的兩種不同熒光信號的熒光探針，確定18%的癌癥病人癌細(xì)胞存在LTK發(fā)生重排，即只有一種3’綠色熒光。通過測序確定CAP-Gly結(jié)構(gòu)域連接蛋白1（CAP-Gly domain containing linker protein 1，CLIP1）的16號外顯子開始與LTK的11號外顯子連接，形成新的融合蛋白CLIP1-LTK。白細(xì)胞受體酪氨酸激酶（?leukocyte tyrosine kinase，LTK）是RTKs胰島素受體超家族中間變性溶質(zhì)瘤激酶（ALK）/LTK亞家族的成員，與ALK激酶結(jié)構(gòu)域有近80%的同源性。因此ALK的抑制劑，如Lorlatinib也能對CLIP1-LTK融合蛋白陽性的癌細(xì)胞有抑制效果（如圖6）。提供CRISPR/Cas9敲除LTK技術(shù)用于探究CLIP1-LTK融合蛋白缺失基因型的代償?shù)拇x途徑變化或耐藥機(jī)理變化，又或者根據(jù)不同的臨床數(shù)據(jù)對LTK定點(diǎn)突變技術(shù)獲得不同的LTK突變型，探究不同突變型中在其他功能及引起癌癥的其他機(jī)理或篩選新的藥物等。

EMSY轉(zhuǎn)錄抑制因子（EMSY transcriptional repressor，EMSY）

隨著科研手段的升級及臨床數(shù)據(jù)庫的增加，臨床研究發(fā)現(xiàn)，EMSY在乳腺癌和卵巢癌中都有異常高表達(dá)的現(xiàn)象，因此也逐漸成為一個新興的治療靶點(diǎn)。EMSY到2003年才被分離確認(rèn)，EMSY與BRCA2和BRCA2樣蛋白結(jié)合，具有與DNA修復(fù)和轉(zhuǎn)錄調(diào)控相關(guān)的功能[10]。最近有文章報道，在肺癌中檢測到EMSY異常高表達(dá)[11]。該研究發(fā)現(xiàn)攜帶KEAP1突變的非小細(xì)胞肺癌（NSCLCs）通常對免疫治療產(chǎn)生耐藥性，并總結(jié)出以下通路方式（如圖7所示）。作者通過基因敲除KEAP1，發(fā)現(xiàn)EMSY會累積，并開始抑制細(xì)胞基因同源重組修復(fù)和干擾素I型免疫應(yīng)答，促使肺癌細(xì)胞免疫逃逸。最終推測出來癌癥病人中KEAP1?（kelch like ECH associated protein 1）的突變導(dǎo)致EMSY泛素化降解途徑受阻，從而引起了EMSY的累積（如圖8所示），最終導(dǎo)致了肺癌對免疫治療的耐受性。EMSY的累積如同雙刃劍，一方面增加免疫治療耐受性，另一方面這種耐受性的肺癌細(xì)胞它們對PARP（poly ADP-ribose polymerase 1）的抑制劑或STING的激動劑更敏感。源井生物可以像文章中研究一樣，根據(jù)客戶需求定點(diǎn)敲除基因（如KEAP1）或?qū)MSY定點(diǎn)突變逃脫泛素化降解，對通路進(jìn)行激活，完善通路中其他未知的位點(diǎn)，助你研究信號通路更加省時省力。

小結(jié)

癌癥一直是醫(yī)學(xué)領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)問題。但有很多原癌基因尚未發(fā)現(xiàn)，對抑癌基因的作用機(jī)理知之甚少。本文粗略地介紹了肺癌中的三個治療新靶點(diǎn)：雌激素相關(guān)受體α（estrogen-related receptor α, ERRα），白細(xì)胞受體酪氨酸激酶（leukocyte tyrosine kinase，LTK）和EMSY轉(zhuǎn)錄抑制因子（EMSY transcriptional repressor，EMSY）。這3個靶點(diǎn)發(fā)現(xiàn)較晚，研究尚少，但也逐漸熱絡(luò)。中醫(yī)有云：對癥下藥。腫瘤靶蛋白的不斷發(fā)現(xiàn)，促使精準(zhǔn)化腫瘤治療時代更快到來，推動了晚期治療中以生物標(biāo)志物為導(dǎo)向的治療模式，我們期待未來出現(xiàn)更多有效的治療方式。

[1] Zheng R, Zhang S, Zeng H, Wang S, Sun K, Chen R, Li L, Wei W and He J. Cancer incidence and mortality in China, 2016. Journal of the National Cancer Center 2022; 2 1-9.

[2] Huss JM, Garbacz WG and Xie W. Constitutive activities of estrogen-related receptors: Transcriptional regulation of metabolism by the ERR pathways in health and disease. Biochim Biophys Acta 2015; 1852: 1912-1927.

[3] Giguere V, Yang N, Segui P and Evans RM. Identification of a new class of steroid hormone receptors. Nature 1988; 331: 91-94.

[4] Mukherjee TK, Malik P and Hoidal JR. The emerging role of estrogen related receptoralpha in complications of non-small cell lung cancers. Oncol Lett 2021; 21: 258.

[5] Pan Z, Wang K, Wang X, Jia Z, Yang Y, Duan Y, Huang L, Wu ZX, Zhang JY and Ding X. Cholesterol promotes EGFR-TKIs resistance in NSCLC by inducing EGFR/Src/Erk/SP1 signaling-mediated ERRalpha re-expression. Mol Cancer 2022; 21: 77.

[6] Sahu A, Wang X, Munson P, Klomp JPG, Wang X, Gu SS, Han Y, Qian G, Nicol P, Zeng Z, Wang C, Tokheim C, Zhang W, Fu J, Wang J, Nair NU, Rens JAP, Bourajjaj M, Jansen B, Leenders I, Lemmers J, Musters M, van Zanten S, van Zelst L, Worthington J, Liu JS, Juric D, Meyer CA, Oubrie A, Liu XS, Fisher DE and Flaherty KT. Discovery of Targets for Immune-Metabolic Antitumor Drugs Identifies Estrogen-Related Receptor Alpha. Cancer Discov 2023; 13: 672-701.

[7] Mao L, Peng L, Ren X, Chu Y, Nie T, Lin W, Zhao X, Libby A, Xu Y, Chang Y, Lei C, Loomes K, Wang N, Liu J, Levi M, Wu D, Hui X and Ding K. Discovery of JND003 as a New Selective Estrogen-Related Receptor alpha Agonist Alleviating Nonalcoholic Fatty Liver Disease and Insulin Resistance. ACS Bio Med Chem Au 2022; 2: 282-296.

[8] Izumi H, Matsumoto S, Liu J, Tanaka K, Mori S, Hayashi K, Kumagai S, Shibata Y, Hayashida T, Watanabe K, Fukuhara T, Ikeda T, Yoh K, Kato T, Nishino K, Nakamura A, Nakachi I, Kuyama S, Furuya N, Sakakibara-Konishi J, Okamoto I, Taima K, Ebi N, Daga H, Yamasaki A, Kodani M, Udagawa H, Kirita K, Zenke Y, Nosaki K, Sugiyama E, Sakai T, Nakai T, Ishii G, Niho S, Ohtsu A, Kobayashi SS and Goto K. The CLIP1-LTK fusion is an oncogenic driver in non-small-cell lung cancer. Nature 2021; 600: 319-323.

[9] The CLIP1-LTK Fusion Is an Oncogenic Driver of NSCLC. Cancer Discov 2022; 12: 286.

[10] Hughes-Davies L, Huntsman D, Ruas M, Fuks F, Bye J, Chin SF, Milner J, Brown LA, Hsu F, Gilks B, Nielsen T, Schulzer M, Chia S, Ragaz J, Cahn A, Linger L, Ozdag H, Cattaneo E, Jordanova ES, Schuuring E, Yu DS, Venkitaraman A, Ponder B, Doherty A, Aparicio S, Bentley D, Theillet C, Ponting CP, Caldas C and Kouzarides T. EMSY links the BRCA2 pathway to sporadic breast and ovarian cancer. Cell 2003; 115: 523-535.

[11] Marzio A, Kurz E, Sahni JM, Di Feo G, Puccini J, Jiang S, Hirsch CA, Arbini AA, Wu WL, Pass HI, Bar-Sagi D, Papagiannakopoulos T and Pagano M. EMSY inhibits homologous recombination repair and the interferon response, promoting lung cancer immune evasion. Cell 2022; 185: 169-183 e119.