蛋白質印跡實驗中二抗的選擇是非常重要的。那么接下來就一起來看Jackson ImmunoResearch公司選擇二抗的相關注意事項吧~

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宿主物種的相容性

如果使用多種二抗，例如探測兩種一抗，請選擇相同的宿主物種以盡量減少任何交叉反應。如果這不可能，則選擇與實驗中其他二抗的宿主物種交叉吸附的二抗。

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交叉反應物種

雖然在蛋白質印跡中不常見，但某些應用需要針對其他物種吸附的二抗，以盡量減少對內源性免疫球蛋白的識別（例如用抗大鼠一抗探測小鼠組織裂解物）

或其他一抗。因此，請選擇可用于預期應用的具有適當交叉吸附的二抗宿主。

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經(jīng)驗或偏好

宿主物種的選擇通常歸結為個人偏好或先前的實驗驗證。在不同宿主物種中產生的二抗之間似乎幾乎沒有質量差異，只是某些物種更適合大規(guī)模生產。

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特異性

選擇具有正確特異性的二抗很重要。盡管全?IgG (H+L)?適用于大多數(shù)免疫測定，但其他專業(yè)特異性允許設計更復雜的實驗，以消除不必要檢測的潛在干擾。

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抗?IgG (H+L)

Jackson ImmunoResearch公司抗?IgG (H+L)與?IgG?分子的重鏈和輕鏈都發(fā)生反應，即與?IgG?的?Fc?和?F(ab')2 / Fab?區(qū)發(fā)生反應（圖?1）。抗?IgG (H+L)?抗體也與其他免疫球蛋白類別（IgM、IgA、IgD、IgE）和亞類發(fā)生反應，因為它們都共享相同的輕鏈（kappa?或?lambda）。

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抗?IgG (H+L)?抗體比抗片段特異性抗體具有更廣泛的表位識別。它們也被建議用于所有一般的免疫檢測程序。

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同種型特異性：Fc?特異性抗體

大多數(shù)一抗是?IgG?同種型。有時根據(jù)抗體的產生方式使用其他類別，例如?IgM?和?IgA。對免疫球蛋白的?Fc?域特異的二抗將特異于該特定?Fc?域的同種型。

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因此，F(xiàn)cγ特異性抗體將對IgG特異性，而對Fcα特異性的抗體將特異性檢測IgA，而Fcμ將檢測IgM。

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還提供泛特異性抗體，可用于檢測兩種或多種同種型。根據(jù)您的應用程序，這可能很有用。選擇對一抗同種型具有特異性的二抗。

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子類特異性

由于同源?Fcγ 結構域的相似性，IgG?特異性抗體將檢測所有 γ 同種型免疫球蛋白。根據(jù)用于生成一抗的小鼠品系，免疫球蛋白的亞類可能是?5?個中的?1?個。在同一個實驗中，您可能有兩種不同亞類的小鼠抗體靶向兩種蛋白質。要區(qū)分兩種一抗，您需要亞類特異性抗體。

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小鼠表達構成其?IgG?同種型的五種可用?IgG?亞類中的四種。它們通常會產生?IgG1、IgG2b?和?IgG3，根據(jù)它們的菌株，它們還會表達?IgG2a?或?IgG2c。

Jackson ImmunoResearch?抗小鼠?IgG?亞類特異性抗體對五種單獨的小鼠?IgG?亞類具有特異性。這些高度特異性的抗體旨在在多重實驗中區(qū)分兩種或多種不同的小鼠?IgG?亞類或用于確定小鼠?IgG?亞類。它們已被人、牛和兔血清蛋白吸附，以J大限度地減少與組織免疫球蛋白、培養(yǎng)細胞上的粘附牛?IgG?和兔一抗的交叉反應。亞類特異性抗體提供亞類之間的精細區(qū)分。

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圖?1：IgG?和?F(ab')2?和?Fc?區(qū)的帶狀圖

圖?2.?斑點印跡顯示山羊抗小鼠?IgG、Fc??? 亞類特異性抗體的特異性。

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單獨的硝酸纖維素條（行）接受?100 ng?“點”的小鼠?IgG?和每個亞類，然后用?PBST?中的?5% (w/v) BSA?封閉。在用?HRP?綴合的山羊抗小鼠亞類特異性抗體探測后，用?TMBM?底物顯色條帶。

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陽性信號網(wǎng)格顯示每個亞類導向抗體的特異性。一些亞類在總?IgG?池中的代表性較差，因此信號較弱（總?IgG?與抗?IgG2c?和?-IgG3）。用于探測的?HRP?偶聯(lián)物是?115-035-205（抗小鼠?IgG1）、115-035-206（抗小鼠?IgG2a）、115-035-207（抗小鼠?IgG2b）、115-035-208（抗-小鼠?IgG2c)?和?115-035-209 (抗小鼠?IgG3)。

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注意：

抗?IgG、Fcγ 片段特異性抗體與所有單克隆一抗的反應不同。對于對四個?IgG?亞類具有平衡反應性的抗小鼠?IgG、Fcγ 片段特異性抗體，選擇山羊抗小鼠?IgG（亞類?1+2a+2b+3）、Fcγ 片段特異性（min X Hu、Bov、Rb Sr Prot?）。

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此外，在單標記實驗或涉及一種小鼠單克隆抗體和來自其他物種的一抗的多重標記實驗中，對于小鼠單克隆抗體的一般檢測，亞類特異性抗體不是必需的。

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Jackson公司專注于親和純化的二抗和純化免疫球蛋白研究，服務領域覆蓋各大學科研所和醫(yī)院里的動物研究以及生物醫(yī)學研究機構的科學家。艾美捷科技是Jackson公司的中國代理商，為科研工作者提供優(yōu)質的產品與服務。