在雙雜交探針中，沒有猝滅劑。 相反，有兩種寡核苷酸，一種攜帶供體熒光團(tuán)，另一種攜帶受體熒光團(tuán)。

供體熒光團(tuán)：一種被特定波長(zhǎng)激發(fā)的染料。 這種染料將其能量貢獻(xiàn)給受體熒光團(tuán)。

受體熒光團(tuán)：受體熒光團(tuán)是一種染料，它從另一個(gè)熒光團(tuán)（供體熒光團(tuán)）接收能量，并利用該能量，受體熒光團(tuán)發(fā)出熒光。 供體和受體熒光團(tuán)都必須接近才能發(fā)生這種情況。

圖 1. 雙雜交探針在供體和受體熒光團(tuán)的基礎(chǔ)上工作，而不是淬滅報(bào)告基因。

雙雜交探針如何工作？

兩個(gè)寡核苷酸，每個(gè)攜帶一個(gè)熒光團(tuán)，用于雙重雜交。

這些寡核苷酸及其熒光團(tuán)接近目標(biāo)序列。 我們可以說目標(biāo)互補(bǔ)序列的一部分在供體中，另一部分在受體熒光團(tuán)中。

然后，發(fā)生稱為熒光共振能量轉(zhuǎn)移（或 FRET）的過程。 FRET 是一種依賴于距離的物理過程，它通過偶極-偶極耦合過程將能量從激發(fā)的分子（或供體熒光團(tuán)）轉(zhuǎn)移到另一個(gè)分子（受體熒光團(tuán)）。

在這里，供體熒光團(tuán)被激發(fā)并將其能量轉(zhuǎn)移到受體熒光團(tuán)，使其發(fā)出熒光。 供體與目標(biāo)序列結(jié)合，當(dāng)它靠近受體時(shí)，它會(huì)轉(zhuǎn)移能量，使受體熒光團(tuán)發(fā)出熒光。

圖2. 雙雜交探針需要供體和受體熒光團(tuán)。 兩個(gè)探頭必須彼此緊密接觸。 這種接近允許電子從供體轉(zhuǎn)移到熒光團(tuán)，然后受體發(fā)出熒光。

該探針的優(yōu)點(diǎn)是對(duì)目標(biāo)序列具有特異性。 缺點(diǎn)是供體和受體熒光團(tuán)的寡核苷酸序列設(shè)計(jì)復(fù)雜。