葡聚糖凝膠C-25(CM Sephadex C25)
葡聚糖凝膠C-25(CM Sephadex C25)用于離子交換色譜、陽離子交換介質(zhì)、蛋白質(zhì)色譜、分離介質(zhì)和樹脂。葡聚糖凝膠C-25是范德生物自主研發(fā)的一種新型高度交聯(lián)的葡聚糖層析介質(zhì)??,?具有高流速、低反壓、高動(dòng)態(tài)載量及良好的化學(xué)穩(wěn)定性。葡聚糖凝膠C-25方便進(jìn)?行規(guī)模放大,?可以縮短生產(chǎn)時(shí)間,?提高生產(chǎn)效率,?降低大規(guī)模生產(chǎn)成本。
葡聚糖凝膠C-25使用方法:
葡聚糖凝膠C-25是顆粒狀,使用時(shí)需要溶脹,其溶脹比取決于所使用的緩沖溶液,不同溶液中的溶脹比不同,而且存在較大差異。溶脹時(shí)不能使用磁力攪拌,否則易導(dǎo)致凝膠破碎。
※ 預(yù)處理:
稱取所需量的葡聚糖凝膠C-25,置于 50~100 倍蒸餾水或者上樣平衡液中,溶脹,室溫 條件下一般需要溶脹 1~2 天,沸水中一般需要 2 小時(shí)。
按每克葡聚糖凝膠C-25加 0.5M HCl 15ml 的比例,將葡聚糖凝膠C-25浸泡于 0.5M HCl 中, 攪勻, 靜置 30 分鐘, 裝入布氏漏斗(墊有 2 層濾紙)中抽濾, 并反復(fù)用蒸餾水抽洗至 pH
呈中性;然后以 0.5M NaOH 同上操作過程處理, 最后以 0.5M HCl 再處理一次。
※ 裝柱
裝柱按照標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程操作。必須保證每種材料都處于工作溫度 ,凝膠裝柱前需要脫氣 。
※ 平衡
使用 2~5 倍柱床體積的上樣平衡液平衡柱子, 務(wù)必使流出液的電導(dǎo)和 pH 同上樣緩沖液的
電導(dǎo)和 pH 完全一致。
※ 上樣
根據(jù)目標(biāo)產(chǎn)物濃度和凝膠的載量確定上樣量 。
※ 清洗
上樣完畢后,再使用上樣緩沖液平衡柱子,清洗掉不結(jié)合的蛋白和雜質(zhì),直至流出液的電 導(dǎo)和 pH 同上樣緩沖液的電導(dǎo)和 pH 完全一致。
※ 洗脫
使用增大緩沖液中鹽離子濃度或者增加 pH 的連續(xù)洗脫或者梯度洗脫。
※ 再生
在柱上先用 1~2M NaCl 洗去柱上的雜蛋白,再用蒸餾水洗去柱中鹽。然后按預(yù)處理過程將葡聚糖凝膠C-25再處理一遍即可 。
※ 存儲(chǔ)
葡聚糖凝膠C-25干粉保存于4~25℃ 、干燥 、通風(fēng)、清潔處;溶脹后的凝膠保存于4~8℃
20%乙醇溶液或 0.01M NaOH 中 。
※ 運(yùn)輸
運(yùn)輸中避免日曬、雨淋、重壓, 嚴(yán)禁與有毒、有害物品混運(yùn)。