注意：

·?請(qǐng)?jiān)诮Y(jié)果圖片中標(biāo)注準(zhǔn)確的蛋白marker位置和大小，并標(biāo)注每個(gè)泳道的樣品信息；

·?請(qǐng)附上內(nèi)參蛋白的檢測(cè)結(jié)果；

·?請(qǐng)用文字語言準(zhǔn)確地描述實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)的問題。

目標(biāo)蛋白出現(xiàn)了兩至三條蛋白條帶，且MDA-MB-231細(xì)胞中有表達(dá)psma蛋白，但pc3細(xì)胞應(yīng)該低表達(dá)甚至不表達(dá)psma蛋白，卻出現(xiàn)了假陽。

3. 產(chǎn)品儲(chǔ)存 (溫度和分裝)

·?儲(chǔ)存溫度:?-20攝氏度

·?是否進(jìn)行分裝及分裝后每管的體積:?未進(jìn)行分裝

4. 檢測(cè)的樣品

·?樣品種屬信息（Human/Mouse/Rat etc.）：Human

·?如果檢測(cè)樣品為細(xì)胞系，請(qǐng)?zhí)峁┘?xì)胞系名稱：mda-mb-231細(xì)胞，pc3細(xì)胞

·?如果檢測(cè)樣品為組織，請(qǐng)?zhí)峁┙M織名稱：

·?是全細(xì)胞裂解液還是某一亞細(xì)胞組分裂解液：全細(xì)胞裂解液

5. 裂解液

·?上樣的蛋白總量（μg/lane）：?10-15μg

·?裂解緩沖液類型：?RIPA裂解液

·?蛋白酶抑制劑：磷酸酶抑制劑混合物，蛋白酶抑制劑混合物

上樣緩沖液成分：

·?煮樣溫度和時(shí)間：100攝氏度，10min

6. 電泳和轉(zhuǎn)膜

電泳 ：

·?使用變性膠（SDS-PAGE）還是native膠（native-PAGE）：SDS-PAGE

·?分離膠濃度：8%

轉(zhuǎn)膜：

·?轉(zhuǎn)膜方法（濕轉(zhuǎn)/半干轉(zhuǎn)?etc.）：濕法

·?轉(zhuǎn)膜電流/電壓和轉(zhuǎn)膜時(shí)間：300mA，2h

·?是否用麗春紅染色檢查過轉(zhuǎn)膜效率？若有，請(qǐng)?zhí)峁?shí)驗(yàn)圖片：否

7. ?封閉條件

·?封閉劑成分（脫脂牛奶/BSA?etc.）和濃度：5%脫脂牛奶

·?封閉時(shí)間和溫度：室溫，2h

8. ?一抗

·?一抗稀釋比例：1:1000

·?抗體稀釋液：TBST

·?孵育時(shí)間和溫度：4攝氏度，10-12h

·?洗液成分（請(qǐng)注明Tween的含量）：TBST, 每1LTBS(1X)加入500μl Tween20

·?洗膜具體步驟：每次10min，洗3次

9. ?二抗

·?產(chǎn)品名稱：Goat Anti-Rabbit IgG(H+L)HRP

·?品牌與貨號(hào)：南京翼飛雪生物科技有限公司??YFSA02

·?二抗稀釋比例：1:5000

·?孵育時(shí)間和溫度：室溫，2h

·?洗液成分（請(qǐng)注明Tween的含量）:TBST, 每1LTBS(1X)加入500μl Tween20

·?洗膜具體步驟：每次10min，洗3次

·?是否與其它一抗搭配使用沒有問題? 如果是，?請(qǐng)?zhí)峁┫嚓P(guān)實(shí)驗(yàn)結(jié)果：與其它一抗搭配使用沒有問題

是

10. 檢測(cè)

·?ECL/ECL+/其它檢測(cè)方法-請(qǐng)說明：ECL

11. 是否使用陽性對(duì)照與陰性對(duì)照? 如果是，請(qǐng)?zhí)峁┫嚓P(guān)實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

12. 請(qǐng)確認(rèn)靶標(biāo)蛋白在所檢測(cè)樣本中的表達(dá)情況，并提供相關(guān)參考文獻(xiàn)或數(shù)據(jù)庫(kù)信息。

The Potential of PSMA as a Vascular Target in TNBC.

13. 是否用過其它同指標(biāo)產(chǎn)品? 如果是，請(qǐng)?zhí)峁┢放啤⒇浱?hào)與實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

無

14. 優(yōu)化步驟

·?您使用該投訴產(chǎn)品進(jìn)行過幾次WB：兩次

·?是否每次都遇到相同問題（例如每次背景條帶都在相同位置）：是的

·?您已經(jīng)優(yōu)化過哪些步驟：延長(zhǎng)封閉時(shí)間

廠家郵件回復(fù):

1.?建議嘗試更換封閉液，比如用5%BSA進(jìn)行封閉:

2.?建議做一個(gè)不孵一抗、只二抗的陰性對(duì)照，檢測(cè)二抗與樣本是否存在非特異性結(jié)合

客戶重新按照廠家的建議做的結(jié)果基本符合實(shí)驗(yàn)要求，售后處理結(jié)束。