定點誘變（SDM）是一種在已知序列中產生突變的體外方法。它通常通過基于PCR的方法進行。通常，一個或兩個堿基在定點誘變中改變。引物可以設計具有所需的突變，以引入核苷酸序列的微小變化。引物延伸和反向PCR可用于引入大規(guī)模突變。這種方法可能會改變特定蛋白質的氨基酸組成。定點誘變用于研究蛋白質活性的變化。它也用于制造融合蛋白。

三種主要類型的方法用于在定點誘變中引入所需的突變。它們是傳統(tǒng)的 PCR、引物延伸和反向 PCR。引物延伸和反向PCR可用于引入大規(guī)模核苷酸變化。

傳統(tǒng)PCR

傳統(tǒng)的PCR可用于通過修飾的引物將一個或兩個核苷酸變化引入靶序列。這些變化可以是核苷酸替換、刪除或添加。突變在PCR過程中被摻入擴增子中。因此，原始序列被引物中的突變序列所取代。

引物延伸

在引物延伸中，在巢式PCR過程中摻入所需的突變。在這里，靶序列兩側是兩個引物。將所需的突變摻入內部引物中，并在第二輪PCR中引入突變。通常，PCR反應的特異性隨著引物中不匹配核苷酸數(shù)量的增加而降低。然而，具有大規(guī)模突變的長內引物可用于引物延伸，因為巢式PCR可以增加PCR反應的特異性。

反向PCR

反向PCR是一種通過將引物設計為已知DNA序列來擴增未知DNA片段的方法。它可用于大規(guī)模替換、刪除或插入核苷酸。

定點誘變的應用如下所述。

1. 研究蛋白質的結構、功能和催化性質

2. 改善蛋白質的性質（蛋白質工程）

3. 引入或移除限制性核酸內切酶位點。