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艾美捷牛C-反應(yīng)蛋白(CRP)ELISA試劑盒原理

2022-12-27 14:39 作者:艾美捷  | 我要投稿

C-反應(yīng)蛋白(C-Reactive Protein,CRP) 是由肝臟生成的血漿蛋白,主要被當(dāng)作發(fā)炎的指標(biāo),因其對肺炎雙球菌的C-多糖體(C-polysaccharide)會(huì)產(chǎn)生沉淀反應(yīng),故取名C-反應(yīng)蛋白。C-反應(yīng)蛋白由5個(gè)24KD原聚體(含206個(gè)氨基酸)以非共價(jià)連結(jié)成為五元體環(huán)形結(jié)構(gòu)。 ???

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C反應(yīng)蛋白會(huì)結(jié)合在死亡細(xì)胞或微生物外膜上的磷酸膽堿(phosphocholine),以激活補(bǔ)體系統(tǒng)。當(dāng)體內(nèi)有急性炎癥、細(xì)菌感染、組織的損傷時(shí),C反應(yīng)蛋白在數(shù)小時(shí)內(nèi)出現(xiàn),而疾病治愈后又很快就消失。C反應(yīng)蛋白并不適用于單一疾病的診斷。它的臨床價(jià)值主要在于組織損傷的篩檢和監(jiān)測,應(yīng)用在判斷病人是否發(fā)炎以及診斷發(fā)炎性疾病復(fù)發(fā)的可能性,藉以評估抗發(fā)炎藥物治療的成效。另外C反應(yīng)蛋白可用來協(xié)助類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的診斷。 ??

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它在肝臟中合成,在人體中通常作為血清中的痕量成分存在,水平低于0.3 mg/dL。 在急性組織損傷后血清中的水平迅速升高,并且在刺激物去除后也非常迅速地下降。已提出CRP有助于補(bǔ)體激活,影響吞噬細(xì)胞功能并增強(qiáng)細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性。過去幾年的研究已經(jīng)表明,血漿或血清中CRP的定量可以提供不僅在人類中,而且在寵物和農(nóng)場牲畜中的疾病的檢測、預(yù)后和監(jiān)測中的有價(jià)值的信息。

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艾美捷牛C-反應(yīng)蛋白(CRP)ELISA試劑盒預(yù)期用途:

該試劑盒是一種高度靈敏的雙位點(diǎn)酶聯(lián)免疫分析(ELISA),用于定量測定牛生物樣品中的CRP。僅供研究使用。

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艾美捷牛C-反應(yīng)蛋白(CRP)ELISA試劑盒原理:

雙抗體夾心ELISA的原理如圖1所示。在該測定中樣品與吸附在聚苯乙烯微量滴定孔表面的抗CRP抗體反應(yīng)。通過洗滌去除未結(jié)合的蛋白質(zhì)后,添加。這些酶標(biāo)記的抗體與先前結(jié)合的CRP形成復(fù)合物。跟隨另一個(gè)洗滌步驟,通過添加顯色底物3,3',5,5'來測定與免疫吸附結(jié)合的酶-四甲基聯(lián)苯胺(TMB)。結(jié)合酶的數(shù)量直接隨樣品中CRP的濃度而變化測試;因此,在450nm處的吸光度是測試樣品中CRP濃度的量度。數(shù)量測試樣品中的CRP可以從由校準(zhǔn)品構(gòu)建的校準(zhǔn)曲線中插值,并根據(jù)樣品稀釋。

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艾美捷牛C-反應(yīng)蛋白(CRP)ELISA試劑盒組件:

1.濃縮稀釋劑

一瓶含有50mL 5X濃縮稀釋液流動(dòng)緩沖液。

2.濃縮洗滌液

一瓶含有50mL 20X濃縮洗滌液。

3.酶抗體結(jié)合物濃縮物

一個(gè)含有150μL 100X濃縮親和純化的抗牛CRP抗體的小瓶

穩(wěn)定緩沖液。

4.TMB基板溶液

一瓶含有12mL TMB和過氧化氫的檸檬酸緩沖液(pH 3.3)。

5.微量滴定板

12個(gè)可拆卸的8個(gè)井條,位于井支架框架內(nèi)??子糜H和純化的抗牛CRP包被。

6.牛CRP校準(zhǔn)器

一個(gè)裝有凍干牛CRP校準(zhǔn)品的小瓶。

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性能特性:

根據(jù)良好的實(shí)驗(yàn)室實(shí)踐,特定CRP的測定需要嚴(yán)格的質(zhì)量控制。每個(gè)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)使用常規(guī)質(zhì)量控制程序來確定批間和批內(nèi)精密度和性能特征。

程序的限制

1.當(dāng)用完整的分析程序進(jìn)行分析時(shí),將獲得可靠和可重復(fù)的結(jié)果了解包裝說明書中包含的信息,并遵守良好的實(shí)驗(yàn)室實(shí)踐

2.可能影響測定性能的因素包括適當(dāng)?shù)膬x器功能、玻璃器皿的清潔度、蒸餾水或去離子水的質(zhì)量、試劑和樣品移液管的準(zhǔn)確度、清洗技術(shù)、培養(yǎng)時(shí)間或溫度。

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除此之外,Kamiya還有各種不同種屬的C-反應(yīng)蛋白(CRP)ELISA試劑盒。


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