一、物理-化學方法

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1.脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法：采用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑，將遺傳物質(zhì)如質(zhì)粒, siRNA等轉(zhuǎn)移至細胞內(nèi)。

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此種方法易于操作且不需要許多步驟或特殊的專業(yè)知識。通常情況下，你只需要一種轉(zhuǎn)染試劑和一種兼容的生長培養(yǎng)基 (通常是低血清且具有良好的緩沖作用，使細胞在轉(zhuǎn)染過程中保持活性)。不同的廠商有自己的配方試劑，有些可以為特定的細胞系設(shè)計配方，所以檢查你的細胞系是否有最佳脂溶性配方。此外，這種方法可與一系列細胞兼容，如HEK 293.

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脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑價格昂貴，但轉(zhuǎn)染效率高，從長遠來看是值得的。

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2.DEAE-葡聚糖法：它是一種陽離子聚合物，可以與帶負電荷的DNA和蛋白質(zhì)結(jié)合，進而被細胞吞噬。

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聚合物濃度、核酸或蛋白質(zhì)與聚合物的比值，以及轉(zhuǎn)染的持續(xù)時間是重要的優(yōu)化參數(shù)，另外，此方法對附著細胞的轉(zhuǎn)染非常有效，也可用于某些懸浮細胞系。

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缺點是一些細胞類型對葡聚糖特別敏感，可能會發(fā)生形態(tài)變化或者抑制細胞生長。

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3.磷酸鈣共沉淀法：DNA與濃縮的氯化鈣溶液混合，然后添加到含有磷酸鹽離子的緩沖液中，形成磷酸鈣-DNA沉淀物，從而被細胞吸收。

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這種方法價格便宜且被廣泛使用，但這種方法轉(zhuǎn)染效率不穩(wěn)定，可能會發(fā)生DNA

聚集等，影響轉(zhuǎn)染的效率，對試劑濃度、PH值等的要求也比較高。

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4.電穿孔法：將細胞短暫暴露于電場中，短脈沖使細胞膜暫時穿孔，可以吸收外來的遺傳物質(zhì)，此方法也適用于傳遞蛋白質(zhì)。

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目前有許多電穿孔裝置，操作不需要專門的專業(yè)知識，但在購買之前一定要向供應商索要設(shè)備的演示，確保它對你的細胞系有效。最佳的電壓、持續(xù)時間和脈沖數(shù)可以增加外來材料的滲透性，對每個不同的細胞系你需要仔細優(yōu)化這些參數(shù)。但是并不是所有細胞都能忍受電穿孔，有些細胞會死亡，另外，電穿孔儀也是相對昂貴的。

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二、生物方法

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腺病毒轉(zhuǎn)導：對于轉(zhuǎn)染困難的細胞，利用病毒載體將遺傳物質(zhì)轉(zhuǎn)移到哺乳動物細胞中

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此方法存在病毒傳播的風險，需要適當?shù)陌踩A防措施。另外，需要包裝細胞系產(chǎn)生能攜帶目的DNA的病毒顆粒。

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成功轉(zhuǎn)染的訣竅：

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哺乳動物細胞系的轉(zhuǎn)染并不簡單，使用哪種方法取決于很多因素，例如:?你的實驗室的預算、電穿孔設(shè)備、你的細胞類型等等，選擇最適的轉(zhuǎn)染方法會有較好的轉(zhuǎn)染效率。

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1.抗生素耐藥性示例----篩選轉(zhuǎn)染成功的細胞

引入遺傳物質(zhì)(通常是一個質(zhì)粒)的同時細胞會產(chǎn)生一種耐抗生素的基因。在轉(zhuǎn)染的最初階段，細胞可能會有點“萎靡”，需要時間來恢復，一兩天之后，你就可以把它們暴露在抗生素環(huán)境下。沒有接受質(zhì)粒的細胞將無法承受，并且會死亡，你就可以用轉(zhuǎn)染的細胞繼續(xù)你的實驗。

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2.盡早確定你的轉(zhuǎn)染效率

比較不同轉(zhuǎn)染方法的一個快速而簡單的方法是使用一個攜帶熒光標記蛋白的質(zhì)粒，這樣你就可以在顯微鏡下觀察轉(zhuǎn)染的細胞。你可能需要嘗試幾種不同濃度的DNA / siRNA來確定你的細胞系的最佳轉(zhuǎn)染效率。

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3.嘗試使用永生細胞系

與原始細胞系相比，永生細胞系無疑更容易工作，但仍然可能會觀察到細胞毒性作用，影響整個轉(zhuǎn)染效率。