目前，PD-1等多款免疫檢查點(diǎn)抑制劑在dMMR或MSI-H轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌（mCRC）的治療中顯示出了臨床療效。然而，其對MSS或MSI-L的結(jié)直腸癌患者療效甚微，而且大多數(shù)mCRC患者的生存獲益仍然不佳。

而LY6G6D在MSS/MSI-L中的高表達(dá)及其在正常組織和其他腫瘤類型中的低表達(dá)使其成為治療結(jié)直腸癌的潛力靶點(diǎn)。

01靶點(diǎn)概述

淋巴細(xì)胞抗原6家族成員G6D (LY6G6D)是位于6號染色體主要組織相容性復(fù)合體(MHC) III類區(qū)域的白細(xì)胞抗原簇。LY6G6D如大多數(shù)家族成員一樣，通過糖基磷脂酰肌醇(GPI)錨定附著在細(xì)胞膜上。

TCGA RNA-seq數(shù)據(jù)分析發(fā)現(xiàn)，同正常結(jié)直腸組織相比，LY6G6D在原發(fā)性和轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸腫瘤組織中顯著上調(diào)。LY6G6D在MSS和MSI-L結(jié)直腸癌中表達(dá)率高，在MSI-H結(jié)直腸癌中表達(dá)率相對較低，而正常組織和非結(jié)直腸癌腫瘤中LY6G6D表達(dá)極低。

此外，LY6G6D在正常前列腺組織中拷貝數(shù)最高，但顯著低于結(jié)直腸腫瘤組織，中位nRPKM分別為0.898和8.431。

在結(jié)腸癌細(xì)胞系中，ERKs和STAT5在基礎(chǔ)條件下的激活是負(fù)相關(guān)的。磷酸化STAT5在轉(zhuǎn)移性細(xì)胞株(SW620)中表達(dá)水平最高，其特征是LY6G6D蛋白表達(dá)顯著增強(qiáng)。而STAT5敲除后顯著降低了LY6G6D水平，表明STAT5能調(diào)控LY6G6D表達(dá)。此外，以CD8+ T淋巴細(xì)胞減少和PD-1/PD-L1低表達(dá)為特征的MMR型癌癥表現(xiàn)出LY6G6D表達(dá)和STAT5活化增強(qiáng)。

此外，另有研究發(fā)現(xiàn)在p38α沉默的HCTC116細(xì)胞中，LY6G6D的表達(dá)顯著降低。這表明p38?MAPK也參與LY6G6D表達(dá)的調(diào)控。

LY6G6D的高水平表達(dá)與免疫抑制類型細(xì)胞的高度浸潤相關(guān)，如調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)和輔助性T細(xì)胞2(Th2)。此外，LY6G6D陽性的MSS細(xì)胞(SW620)能通過骨髓源性抑制細(xì)胞(MDSC)的擴(kuò)增抑制T細(xì)胞增殖。盡管對其功能了解有限，但已有研究表明它可能在CRC中調(diào)控腫瘤生長和免疫逃避。LY6G6D在MSS CRC上的特異性表達(dá)使其成為基于抗體治療的一個(gè)有潛力的靶點(diǎn)。

吉滿生物根據(jù)市場需求和研究現(xiàn)狀，推出構(gòu)建LY6G6D過表達(dá)穩(wěn)定細(xì)胞系/抗體的服務(wù)（詳細(xì)數(shù)據(jù)見文末），可用于抗體篩選、表征、一致性評價(jià), 充分滿足藥物研發(fā)的需求，助力抗體藥物臨床申報(bào)。

02新型LY6G6D/CD3雙抗?

LY6G6D作為繼KRAS、HER2、EGFR、VEGF、GPA33等靶向結(jié)直腸癌的又一新興靶點(diǎn)，目前開發(fā)的藥物比較少，公開披露的僅Genentech開發(fā)的LY6G6D/CD3 T細(xì)胞依賴性雙抗（TDB）。

LY6G6D-TDB，是抗LY6G6D和抗CD3E抗體使用 “knob-into-holes”技術(shù)組裝成的全長IgG1雙特異性抗體。在CHO細(xì)胞中進(jìn)行重組表達(dá)，抗體在Fc含有突變(CH3 N297G)，進(jìn)而減少與Fcγ受體的結(jié)合，從而減少Fc效應(yīng)功能。

體外細(xì)胞毒性試驗(yàn)表明，CD3的高親和力使靶細(xì)胞殺傷效能提高了26倍，T細(xì)胞活化效能提高了4倍。因此，為獲得更好的LY6G6D-TDB活性而選擇設(shè)計(jì)了高親和力的CD3臂。

LY6G6D-TDB 對于不同LY6G6D表達(dá)水平的CRC細(xì)胞均有較好的細(xì)胞毒性，EC50值為7.11-19.49 ng/mL，而對LY6G6D-細(xì)胞系HEK293無細(xì)胞毒性。

同時(shí)，LY6G6D-TDB的作用依賴于LY6G6D的表達(dá)（A）和CD3+ T細(xì)胞的存在（B），只有當(dāng)LY6G6D+ CBC細(xì)胞存在時(shí)才能誘導(dǎo)T細(xì)胞活化和細(xì)胞因子的分泌（D），同時(shí)T細(xì)胞活化也具有劑量依賴性（E-G）。

體內(nèi)試驗(yàn)表明，LY6G6D-TDB單劑量和與PD-1聯(lián)用均表現(xiàn)出顯著的療效。5 mg/kg和1?mg/kg的單劑量LY6G6D-TDB治療（n=10），分別有9只和5只小鼠出現(xiàn)PR；與PD-1聯(lián)用時(shí)，療效更為顯著，ORR達(dá)100%（C）。

LY6G6D-TDB對已建立的結(jié)直腸癌異種移植瘤的抗腫瘤效果表明，LY6G6D-TDB可以將免疫效應(yīng)細(xì)胞定向到結(jié)直腸癌細(xì)胞附近并誘導(dǎo)抗腫瘤反應(yīng)。

與其他被選為用于治療結(jié)直腸癌的雙特異性T細(xì)胞銜接劑的TAA (如P-cadherin和GUCY2C)相比，LY6G6D表現(xiàn)出“清潔”TAA的特征，在正常組織中表達(dá)有限，而在結(jié)直腸癌中表達(dá)升高，因此可能會降低"靶內(nèi)、腫瘤外"毒性的風(fēng)險(xiǎn)。

在正常組織和腫瘤組織中差異表達(dá)如此之大的表面蛋白非常罕見，目前還沒有靶向LY6G6D的其他治療藥物的報(bào)道。這些數(shù)據(jù)證明，靶向LY6G6D的新型T細(xì)胞結(jié)合雙特異性抗體有可能為結(jié)直腸癌患者提供臨床獲益。

吉滿生物科技（上海）有限公司，是位于上海浦東的一家以創(chuàng)新為驅(qū)動的工程化細(xì)胞系研發(fā)公司，基于自有的國內(nèi)最大報(bào)告基因平臺、慢病毒平臺以及最迅速的藥研網(wǎng)資訊平臺，目前已構(gòu)建出500余株現(xiàn)貨單克隆細(xì)胞系產(chǎn)品，覆蓋ROR1/DLL3/SLC39A6/TROP2/BCMA/BDCA/TREM2……200余新藥熱門靶點(diǎn)，其中有90余靶點(diǎn)開發(fā)有對應(yīng)luciferase reporter方法，更有國內(nèi)獨(dú)家/首家CCR8, BDCA, TREM2和GAPR等luciferase的assay平臺。

LY6G6D細(xì)胞系/抗體產(chǎn)品列表

部分結(jié)果：

GM-C27572：H_LY6G6D CHO-K1 Cell Line

使用Anti-LY6G6D hIgG1 Antibody流式驗(yàn)證結(jié)果

GGM-C27573：H_LY6G6D HEK-293 Cell Line

使用Anti-LY6G6D hIgG4 Antibody流式驗(yàn)證結(jié)果

GM-C27574：Cynomolgus_LY6G6D HEK-293 Cell Line ??

使用Anti-LY6G6D?hIgG4 Antibody流式驗(yàn)證結(jié)果

吉滿生物助力藥物研發(fā)，緊隨前沿靶點(diǎn)資訊，儲備幾百株現(xiàn)貨細(xì)胞，覆蓋GPCR、細(xì)胞因子、免疫檢查點(diǎn)、TAA等多領(lǐng)域近200余個(gè)靶點(diǎn)。

2020年底成立專業(yè)細(xì)胞系子品牌DDXCELL，同時(shí)已建立了DDXCELL現(xiàn)貨查詢小程序。截止當(dāng)前已布局近200個(gè)熱門靶向藥靶點(diǎn)500余株細(xì)胞系，旨在助力、加速大分子早期研發(fā)，做到進(jìn)口細(xì)胞的國產(chǎn)替代。同時(shí)可根據(jù)客戶需求提供細(xì)胞系服務(wù)。