核糖核酸酶A是內(nèi)切核糖核酸酶，可特異地攻擊RNA上嘧啶殘基的3'端，切割與相鄰核苷酸形成的磷酸二酯鍵。反應(yīng)終產(chǎn)物是嘧啶3'磷酸及末端帶嘧啶3'磷酸的寡核苷酸。無(wú)輔因子及二價(jià)陽(yáng)離子存在時(shí)，核糖核酸酶A的作用可被胎盤RNA酶抑制劑(B1ackburn et al．1977)或氧釩—核糖核苷復(fù)合物(Puskas et al．1982)所抑制。?

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艾美捷科核糖核酸酶?A（WBC-LS003435）技術(shù)說(shuō)明：

應(yīng)特別注意酶的處理，因?yàn)樗c玻璃表面的親和力。該酶保持活性，但在凍干時(shí)聚集，并在低離子強(qiáng)度的溫度≥2°C的溶液中聚集。RNase A的加熱溶液使DNA酶失活可能不令人滿意，因?yàn)槿绻l(fā)生沉淀形成并且熱處理的DNase可能會(huì)隨著時(shí)間的推移重新激活，RNA酶活性可能會(huì)喪失。代碼： RPDF 適用于需要最低 DNase 和蛋白酶水平且無(wú)需進(jìn)一步處理的應(yīng)用。代碼： RAF在某些應(yīng)用中無(wú)需處理即可使用。要熱處理 RAF，請(qǐng)使用 10mM 乙酸鹽 pH 5.0 和或不帶 15mM CaCl 2 在 15°C 或更長(zhǎng)時(shí)間下在 100°C 下 80 分鐘。 如果在中性pH下加熱，可能會(huì)沉淀。代碼的熱處理：由于磷酸鹽的存在，RASE會(huì)沉淀。 ?

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核糖核酸酶A測(cè)定：

方法

由于反應(yīng)發(fā)生的速率不同以及從生物來(lái)源分離的RNA中核苷酸模式的顯著差異，核糖核酸酶活性的標(biāo)準(zhǔn)化一直很困難?？唆斂说?（1960）發(fā)表了一種使用合成底物胞苷2'，3'-磷酸的測(cè)定。Zimmerman和Sandeen（1965）描述了使用聚胞苷酸的靈敏測(cè)定。

卡爾尼茨基等人的方法。（1959）在沃辛頓使用。pH 5.0 下酵母 RNA 的水解速率是通過(guò)測(cè)量在規(guī)定條件下釋放的酸溶性寡核苷酸的量來(lái)確定的。一個(gè)單位導(dǎo)致吸光度在 A 時(shí)增加 1.0260在37°C和pH 5.0的特定條件下。

試劑

0.10 M 醋酸鈉緩沖液，pH 5.0

25%高氯酸，含0.75%乙酸鈾酰

1%沃辛頓酵母RNA在0.10M乙酸鈉中，pH 5.0。測(cè)定前平衡至37°C。

酶

在試劑級(jí)水中以?1 mg/ml 制備儲(chǔ)備溶液。在測(cè)定前，在pH 2.4的6.0M乙酸鈉中進(jìn)一步稀釋至每毫升10，5和0微克。

程序

將一毫升相應(yīng)的酶稀釋液移入離心管中。包括含有一ml 0.10 M乙酸鈉緩沖液，pH 5.0的空白。將所有試管在 37°C 下孵育 5-8 分鐘。每隔一段時(shí)間，加入一毫升1%的RNA。將每個(gè)試管孵育4分鐘，并通過(guò)加入一ml乙酸鈾酰-高氯酸溶液停止反應(yīng)。轉(zhuǎn)移到冰浴中冷卻5分鐘。通過(guò)離心澄清并用試劑級(jí)水將0.1ml透明上清液稀釋至3.0ml。閱讀 A260與空白。

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核糖核酸酶?A部分引用文獻(xiàn)：

Aktipis, S. and Iammartino, A.

Photochemical Modification of Aromatic Residues in Irradiated Ribonuclease , Biochim Biophys Acta 278 , 239 , 1972

Allewell, N. and Sama, A.

The Effect of Ammonium Sulfate on the Activity of Ribonuclease A , Biochim Biophys Acta 341 , 484 , 1974

Alonso, J. , Nogues, M. and Cuchillo, C.

Modification of Bovine Pancreatic Ribonuclease A with 6-Chloropurine Riboside , Arch Biochem Biophys 246 , 681 , 1986

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核糖核酸酶?A相關(guān)研究：

無(wú)核酸酶白蛋白?脫氧核糖核酸酶?I （DP/D/DCLS/D2/DPFF/DPRF） 組蛋白 （H， NHL） 溶菌酶 （LY/LYSF） 微球菌核酸酶 （NFCP） 核酸酶，S1 （中新/中核酸） 核酸，DNA，大腸桿菌，λ/片段，RNA磷酸酶，堿性（CAP/BAPF/BAPC/BAPSF/PC）磷酸二酯酶 I （VPH） 磷酸二酯酶 II （SPH） 蛋白酶 K （PROK/PROKS）逆轉(zhuǎn)錄酶，重組 HIV （RTHIV） 核糖核酸酶 T1，無(wú)動(dòng)物源性 （RT1S）??