互補(bǔ) DNA (cDNA) 是由信使 RNA 分子合成的 DNA。 cDNA 合成由一種稱為逆轉(zhuǎn)錄酶的酶催化，該酶使用 RNA 作為 DNA 合成的模板。 逆轉(zhuǎn)錄酶最初是從逆轉(zhuǎn)錄病毒中發(fā)現(xiàn)和分離的。 這些病毒包含一個 RNA 基因組； 因此，病毒需要產(chǎn)生其基因組的 cDNA 拷貝，以與宿主細(xì)胞的分子機(jī)制相容。

圖1.cDNA的合成

有多種合成 cDNA 的方法； 我們簡單介紹下傳統(tǒng)方法合成 cDNA。

• oligo(T) 片段用作引物以結(jié)合每個 RNA 的 3' poly(A) 尾巴。
  

• 逆轉(zhuǎn)錄酶以 RNA 為模板合成 cDNA 鏈。

• 所得的 RNA-cDNA 雜交體用堿或 RNase 處理以水解 RNA。

• 擱淺的 DNA 自身折疊起來并在 3' 端形成一個環(huán)。 由此產(chǎn)生的環(huán)的雙鏈部分作為 DNA 聚合酶的引物，合成互補(bǔ)的 DNA 鏈。

• S1 核酸酶將切斷環(huán)，產(chǎn)生雙鏈 DNA。