今年諾貝爾醫(yī)學獎授予美國科學家卡塔林·卡里科（Katalin Karikó）和德魯·魏斯曼（Drew Weissman），表彰他們在核苷堿基修飾方面的發(fā)現(xiàn)，從而開發(fā)出有效的mRNA疫苗。mRNA疫苗作為一種新型疫苗，不僅在新冠中有突出的貢獻，同樣有益于其他疾病，尤其是傳染性疾病的預防上。小優(yōu)整理了二位科學家在近年來mRNA疫苗的開發(fā)中使用的關鍵試劑，讓大家有更好的選擇。 一、無內毒素質粒純化試劑盒 Drew Weissman在研究中一直選擇來自QIAGEN的Endofree plasmid kit，他關注于質粒的產(chǎn)品、純度、內毒素以及超螺旋占比，對后續(xù)的IVT效率有較大的影響，多次發(fā)表在Vaccine、Nature、Science Advances等雜質中

[1,2,3]

。 二、病毒RNA純化試劑盒 QIAamp viral RNA mini kit為新冠研究中的明星試劑盒，被WHO和中國CDC推薦為病毒RNA純化的第一選擇試劑，其獨特的回收柱有高達90%的回收率，同樣有96孔板高通量形式，適合多種的應用場景[3]。 三、mRNA純化/回收試劑盒 作為mRNA疫苗生產(chǎn)的關鍵步驟之一，mRNA的加帽率較為重要，純化效率是mRNA疫苗中的關鍵一環(huán)，Katalin Karikó發(fā)表在Pharmaceutics雜志上題為 “Ribozyme Assays to Quantify the Capping Efficiency of In Vitro-Transcribed mRNA” 的一篇文章中，設計了一種核酶介導的加帽效率測定方法，經(jīng)過實驗驗證，其加帽效率測定方法優(yōu)于傳統(tǒng)方法。使用了QIAGEN基于硅膠模柱分級純化方案，即QIAGEN RNeasy Mini kit。該試劑盒中的硅膠模純化柱可以在不同的緩沖液條件下，結合不同長度的RNA片段。最后，將硅膠柱純化得到的短5'切割產(chǎn)物和核酶用21% PAGE+8M尿素或者LC-MS進行定量分析和可視化，得出不同方法的結果比較。具體流程如下

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四、蛋白純化試劑

QIAGEN的Ni產(chǎn)品一直備受青睞，2022年諾貝爾化學獎得主Carolyn R.Bertozzi，Morten Meldal 和K.Barry Sharpless也多次使用Ni-NTA產(chǎn)品，其四價螯合比Ni-IDA 3價螯合獲得的純化更高，一次純化即可得到95%純化蛋白，結合量克搞到50mg蛋白/mL樹脂。Drew Weissman同樣使用QIAGEN的Ni產(chǎn)品并發(fā)表在頂級雜質上

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參考文獻：

#1：Anti-PfGARP activates programmed cell death of parasites and reduces severe malaria

#2：Tick immunity using mRNA, DNA and protein-based Salp14 delivery strategies

#3：Immunogenicity and protective efficacy of SARS-CoV-2 mRNA vaccine encoding secreted non-stabilized spike in female mice

#4：Ribozyme Assays to Quantify the Capping Efficiency of In Vitro-Transcribed mRNA

#5：mRNA-LNP expressing PfCSP and Pfs25 vaccine candidates targeting infection and transmission of Plasmodium falciparum

#6：mRNA vaccination induces tick resistance and prevents transmission of the Lyme disease agent

#7：In vivo adenine base editing of?PCSK9?in macaques reduces LDL cholesterol levels

#8：A Multi-Targeting, Nucleoside-Modified mRNA Influenza Virus Vaccine Provides Broad Protection in Mice

#9：SARS-CoV-2 mRNA Vaccines Foster Potent Antigen-Specific Germinal Center Responses Associated with Neutralizing Antibody Generation

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