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DNA甲基化研究,節(jié)省時(shí)間和降低成本至關(guān)重要

2021-01-07 16:41 作者:艾美捷  | 我要投稿

DNA甲基化(DNA methylation)為DNA化學(xué)修飾的一種形式,能夠在不改變DNA序列的前提下,改變遺傳表現(xiàn)。所謂DNA甲基化是指在DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶的作用下,在基因組CpG二核苷酸的胞嘧啶5號(hào)碳位共價(jià)鍵結(jié)合一個(gè)甲基基團(tuán)。大量研究表明,DNA甲基化能引起染色質(zhì)結(jié)構(gòu)、DNA構(gòu)象、DNA穩(wěn)定性及DNA與蛋白質(zhì)相互作用方式的改變,從而控制基因表達(dá)。

一、DNA甲基化修飾相關(guān)產(chǎn)品

DNA甲基化修飾研究手段——DNA亞硫酸鹽轉(zhuǎn)化,使用亞硫酸氫鈉將胞嘧啶轉(zhuǎn)化為尿嘧啶,而5-甲基胞嘧啶(5-mC)保持完整。 即未甲基化的胞嘧啶殘基被脫氨成尿嘧啶,甲基化的胞嘧啶(5-mC)殘基不受影響,這使PCR擴(kuò)增可將尿嘧啶視為胸腺嘧啶,將5-mC或5-hmC識(shí)別為胞嘧啶。 這樣便能夠區(qū)分甲基化和未甲基化的胞嘧啶殘基,從而提供有關(guān)DNA甲基化區(qū)域的單核苷酸分辨率信息。



要成功地進(jìn)行DNA甲基化研究,必須進(jìn)行完全轉(zhuǎn)化,并減少通常由于嚴(yán)酷的化學(xué)反應(yīng)而導(dǎo)致的DNA降解量?;趤喠蛩釟潲}和亞硫酸氫鈉的方法是用于研究DNA甲基化并幫助制備基因組DNA進(jìn)行基因特異性DNA甲基化分析的常用方法。 亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化后通常是下游應(yīng)用,在基因特異性基礎(chǔ)上分析DNA甲基化的流行下游方法包括亞硫酸氫鹽測(cè)序,甲基化特異性PCR(MS-PCR)和基于甲基化的微陣列。

整個(gè)轉(zhuǎn)換過程中,高質(zhì)量的DNA是至關(guān)重要的,因?yàn)檗D(zhuǎn)換過程中的酸性物質(zhì)會(huì)破壞DNA。而對(duì)于大規(guī)模亞硝酸氫鹽轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn),高通量選擇對(duì)于節(jié)省時(shí)間和降低成本至關(guān)重要。



此外,還有高通量DNA修飾試劑盒,EpiNext高靈敏度亞硫酸氫鹽測(cè)序試劑盒(Illumina),一步法DNA修飾試劑盒,Methylamp通用甲基化DNA試劑盒,Methylamp全細(xì)胞亞硫酸氫鹽修飾試劑盒等。

二、甲基化DNA PCR & NGS 分析試劑盒

上面我們了解了DNA甲基化修飾相關(guān)的產(chǎn)品,也了解了DNA經(jīng)過修飾后適用于下游分析:如亞硫酸氫鹽測(cè)序、甲基化特異性PCR(MS-PCR)和基于甲基化的微陣列。


三、甲基化DNA免疫沉淀

甲基化DNA免疫沉淀(meDIP)是一種基于抗體的大規(guī)模技術(shù),用于富集和捕獲甲基化DNA片段,可用于在基因組范圍內(nèi)進(jìn)行基因特異性DNA甲基化研究。 遵循meDIP方法,可以使用多種下游應(yīng)用程序分析DNA甲基化,包括meDIP-PCR,meDIP-ChIP和meDIP測(cè)序。



我們來看看富集的效果,系列圖分別對(duì)應(yīng)p-1015,p-1038,p-1052



四、DNA甲基化抗體

具有良好特征和高度驗(yàn)證的DNA甲基化抗體和DNA去甲基化抗體可能有助于提高研究人員對(duì)DNA甲基化及其在疾病、細(xì)胞周期調(diào)控和胚胎發(fā)育中的作用的理解。如:

5-Hydroxymethylcytosine (5-hmC) Monoclonal Antibody [HMC/4D9],A-1018,適用實(shí)驗(yàn)類型:DB, ELISA, hMeDIP, IF, IHC;

DNMT1 Monoclonal Antibody [60B1220.1],A-1001,適用實(shí)驗(yàn)類型:ELISA, IF, IP, WB

DNA甲基化鏈接:

amyjet.com/featured/dna


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